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Notch信号途径广泛存在于多种生物体内，进化上高度保守，在胚胎发育、血细胞发育及肿瘤形成等多种病理生理过程中发挥重要作用。目前体外研究Notch信号对细胞增殖、分化和凋亡的作用多采用Notch配体刺激。Notch配体表达系统分为真核表达系统和原核表达系统。真核表达绝大多数是哺乳动物细胞系，如CHO，COS7等，但由于哺乳动物细胞表达系统成本高、难操作、表达水平低，限制其广泛应用。而原核表达系统由于没有翻译后加工修饰系统，表达的真核细胞蛋白质多以包涵体形式表达，复性纯化方法复杂。而毕赤酵母表达系统兼有原核生物和真核生物的某些优点：有翻译后加工修饰系统，酵母能在简单廉价的培养基中快速高密度地繁殖，产量高，成本低，可进行工业化生产。因此在选择Notch配体的表达系统中我们首先选者毕赤酵母，其次是原核表达系统，但需要实现可溶性表达，以利于大规模应用。 Notch信号在造血系统发育中起着十分重要的作用：Notch信号使共同淋巴样祖细胞向T细胞方向分化，抑制向B细胞方向的分化；在外周脾脏B细胞发育中，Notch信号激活使其向边缘带B细胞方向分化。此外，Notch信号的失调与血液系统的许多肿瘤相关，Notch信号与T细胞的恶性转化密切相关，Notch在其中起着癌基因的作用。但Notch信号在B细胞肿瘤中的作用仍没有定论：Notch促进B细胞肿瘤的发生，还是抑制B细胞肿瘤的生长？Notch信号在B细胞肿瘤中起着癌基因作用，还是抑癌基因？不同研究组结论不一致。 我们主要进行了如下几方面的研究： 1、毕赤酵母表达重组人Delta-like1（hDll1）蛋白。PCR法扩增hDll1-127-225和hDll1-26-225片段，截取已有质粒pMikneo-Fc中Fc片段，构建酵母表达载体pPIC9K-hDll1-127-225-Fc，pPIC9K-hDll1-26-225-Fc和pPIC9K-Fc，经过组氨酸营养缺陷，G418抗生素双重筛选阳性转化子，甲醇诱导表达。 2、重组hDll1的原核表达。构建原核表达载体pGEX4T1-hDll1-127-225，pGEX4T1-hDll1-26-225，pET32a-hDll1-127-225和pET32a-hDll1-26-225，转化大肠杆菌BL21，IPTG、30℃低温诱导表达。 3、重组hDll1蛋白生物学功能的检测。通过报告基因实验及检测Notch下游分子Hes1的表达检测重组hDll1的生物学活性，并通过FACS及RT-PCR检测其对Raji细胞Notch信号的激活作用。 4、Notch信号对Raji细胞凋亡、增殖的作用；Notch通路与BCR通路共同对Raji细胞生长的影响及其可能的分子基础。重组hDll1激活Raji细胞Notch或GSI阻断其Notch通路，以AnnexinV-PI染色、CFSE染色，通过流式细胞仪FACS研究Raji细胞凋亡、增殖。WesternBlot检测与Raji细胞增殖密切相关c-myc的变化。 结论：实现了hDll1-26-225-Fc和人IgG1Fc片段的在毕赤酵母中的表达；30℃低温诱导实现重组hDll1（His-hDll1-127-225）的可溶性表达；通过报告基因实验，FACS及检测Notch下游分子Hes1的mRNA、蛋白表达验证了重组hDll1（His-hDll1-127-225）的生物学活性；Notch激活抑制Raji细胞凋亡，促进其增殖，Notch阻断剂GSI促进Raji细胞凋亡，抑制其增殖；Notch通路与BCR通路协同促进Raji细胞的增殖，这种协同作用能被GSI所阻断，c-myc可能在其中起关键作用。