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背景:三阴乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)的特征在于缺乏α-雌激素受体,黄体酮受体和HER2受体的表达,恶性程度高、易转移及临床预后差,且目前尚无有效的靶向治疗手段。目的:雌激素(E2)和上皮生长因子(EGF)参与促进三阴乳腺癌的恶性演进,但其信号机制尚不完全清楚。本研究旨在探讨E2和EGF对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-23(231)和MDA-MB-468(468)上皮细胞-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及钙调蛋白-YAP信号通路在其中的介导作用,为探寻TNBC的治疗靶点提供实验依据。方法:人源TNBC细胞231、468作为细胞分子实验模型细胞、鼠源TNBC细胞4T1作为动物实验模型细胞。细胞常规培养,以E2/EGF(溶剂作为对照)刺激处理模型细胞,需要时用YAP特异性抑制剂XMU-MP-1(XMU)和 Radicical(RAD)或钙蛋白酶抑制剂 Calpeptin(Cal)和 Calpain Inhibitor Ⅲ(CIⅢ)预处理细胞,以干预相应胞内蛋白活性;采用MTT试验和平板克隆试验观察细胞活性/增殖能力;V-FITC/PI荧光凋亡试剂盒检测细胞凋亡;通过蛋白印迹法检测细胞目的蛋白表达水平;裸鼠皮下荷瘤实验检测细胞在裸鼠成瘤情况;通过病理切片HE染色观察各组肿瘤组织病理学变化。结果:(1)E2(10nM)、EGF(10μg/L)刺激模型细胞24h,可显著增强231细胞增殖能力56.95%、36.47%(*P<0.05),468 细胞也增强 33.86%、31.57%(*P<0.05);231 细胞菌落形成率增强 106%、328.0%(*P<0.05),468 细胞也增强 234.4%、139.8%(*P<0.05);231、468细胞明显减少中晚期凋亡细胞;诱导乳腺癌231细胞EMT表型变化,细胞纤连蛋白(Fibronectin,FN)和波形蛋白(Vimentin,Vim)出现表达上调67.65%、44.85%(*P<0.05)和 63.92%、81.27%(*P<0.05),E-钙黏素(E-cadherin,E-Cad)表达则明显下调68.63%、53.74%(**P<0.01)。(2)Cal(10μM)预处理细胞2h,明显抑制E2或EGF诱导细胞增殖能力,Cal(10μM)预处理231细胞增殖率下降 30.38%、27.83%(*P<0.05)、CI Ⅲ(10μM)预处理 231 细胞增殖率下降 40.88%、41.62%(*P<0.05);Cal 预处理 468 细胞增殖率下降 33.22%、30.74%(*P<0.05)、CⅠ Ⅲ预处理 468 细胞增殖率下降 38.16%、34.93%(*P<0.05);细胞菌落形成率显著减少,Cal预处理231细胞菌落形成率下降43.75%、29.31%(*P<0.05)、CⅠ Ⅲ预处理 231 细胞菌落形成率下降 68.97%(*P<0.01)、42.62%(*P<0.05);Cal 预处理 468 细胞菌落形成率下降 32.29%、32.74%(*P<0.05)、CⅠ Ⅲ预处理468细胞菌落形成率下降32.88%、45.93%(*P<0.05);EMT表性变化,FN 表达明显下调,42.36%(*P<0.05)、69.42%(**P<0.01),Vim 表达明显下调 65.43%(**P<0.01)、55.39%(*P<0.05),E-Cad 则表达上调 100.1%(**P<0.01)、69.24%(*P<0.05)。(3)Cal 预处理模型细胞,明显下调 E2或 EGF 诱导 231 细胞磷酸化 LATS1(p-LATS 1)蛋白表达 51.24%、85.79%(*P<0.05)和磷酸化 YAP(p-YAP)94.36%、87.58%(*P<0.05);CI Ⅲ预处理模型细胞468 也可降低 p-LATS1 表达 61.34%、83.49%(*P<0.05)和 p-YAP 蛋白表达 66.47%(**P<0.01)、59.28%(*P<0.05);同时促进 YAP 核内转移。(4)XMU(10 μM)分别预处理模型细胞3h,明显抑制E2或EGF诱导细胞231细胞的增殖率40.62%(*P<0.05)、41.59%(**P<0.01)和 468 细胞的增值率 63.84%(**P<0.01)、41.70%*P<0.05),RAD(10μM)预处理模型细胞2h,231细胞增殖率下降62.63%(**P<0.01)、37.69%(*P<0.05)和 468 细胞增值率下降 61.01%、36.03%(**P<0.01);细胞菌落形成率显著减少,XMU诱导细胞231细胞菌落形成率降低 26.45%(*P<0.05)、24.63%(**P<0.01)和 468 细胞菌落形成率降低 59.83%(*P<0.05)、20.42(**P<0.01);XMU、RAD预处理细胞明显增加中晚期凋亡细胞;抑制细胞侵袭及EMT表型变化,FN表达下调77.47%(*P<0.05)、73.16%(**P<0.01)和 Vim 表达明显下调 89.36%、81.48%(**P<0.01),E-Cad 出现表达上调 26.72%、68.63%(*P<0.05)。(5)裸鼠腹腔注射 CⅠ Ⅲ(1mg/kg)明显抑制4T1细胞移植瘤生长,裸鼠体重下降1.75倍(*P<0.05),肿瘤重量下降3.42倍(*P<0.05),体积下降3.48倍(*P<0.05),病理学检测显示肿瘤细胞减少。结论:E2和EGF促进TNBC细胞增殖、增强细胞抗凋亡能力并诱导EMT表型;CANP-YAP信号通路可能参与介导E2和EGF诱导的EMT表型及细胞恶性生物学行为变化。