论文部分内容阅读
目的:(1)观察间日疟原虫疫苗候选分子PvMSP1(Plasmodium vivax merozoite surface protein1)对树突状细胞(dendritic cell, DC)分化成熟和功能的影响；(2)探讨PvMSP1通过TLR (Toll Like Receptors)通路活化DC的作用。方法:(1)将重组表达质粒PET28a-PvMSP1转化至大肠杆菌BL21(DE3+)中,IPTG诱导表达PvMSP1重组蛋白,Ni柱亲和层析纯化重组蛋白,快速液相蛋白层析分离系统(FPLC)进一步纯化并检测其纯度,SDS-PAGE电泳验证目的蛋白；(2)用健康成人外周血分离单核细胞,在细胞因子IL-4、GM-CSF的作用下获得未成熟DC (immature DC, imDC);(3)用不同剂量的PvMSP1(1.0μg/ml、10.0μg/ml、100.0μg/ml)分别诱导imDC继续分化；(4)流式细胞术分析不同处理的DC表面成熟性相关分子CD83、CD86、HLA-DR的变化；(5)ELISA检测DC培养上清中IL-10、IL-12的表达水平；(6)RT-PCR检测DC TLR4、TLR9mRNA的表达水平；(7)MTT法检测DC诱导白体淋巴细胞增殖的能力。结果:(1)获得了PvMSP1重组蛋白,其蛋白纯度达94%；(2)外周血单核细胞能在IL-4、GM-CSF的诱导下分化为imDC,细胞具有典型的DC特征性形态；LPS能够诱导DC成熟,其表面成熟性分子CD83、CD86、HLA-DR的表达均增加;(3)PvMSP1对DC表型的影响：与未刺激组比较,PvMSP1诱导组CD83、CD86、HLA-DR的表达均明显增高(P0.01,P0.05,P0.05),但其不同剂量组各表型的表达均无明显变化(p>0.05)；(4)DC细胞因子IL-10、IL-12的表达水平：与未刺激组比较,LPS诱导组IL-10、IL-12的表达量均明显增加(p>0.01),PvMSP1诱导组IL-10、IL-12的表达量也均明显增加(P0.05,P0.01),但其不同剂量组IL-10、IL-12的表达量均无明显变化(p>0.05)；(5)DC TLR4、TLR9mRNA的表达水平：与未刺激组比较,PvMSP1诱导组DC TLR4mRNA的表达均明显增加(p>0.01),TLR9mRNA的表达均无明显变化(p>0.05),但其不同剂量组TLR4、TLR9mRNA的表达也均无明显变化；与PvMSP1各剂量组比较,LPS诱导组TLR4mRNA的表达增加(p<0.05),TLR9mRNA的表达无明显变化；(6)DC对白体淋巴细胞增殖作用：与未刺激组比较,PvMSP1诱导组MTT数值均明显增加(P0.01),但其不同剂量组MTT数值均无明显变化(p>0.05)。结论：(1)PvMSP1具有促进DC分化成熟的作用,且经其诱导成熟的DC具备抗原递呈功能；(2)PvMSP1可经TLR4通路而非TLR9通路诱导DC成熟。