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水稻纹枯病是世界性的水稻病害,对水稻生产威胁巨大。在各洲水稻种植国家普遍发生,一般减产10%～30%,严重时可达50%。该病在我国已经成为最严重的水稻病害,目前还未见有关发现对该病高抗的水稻品种。该病的致病菌,立枯丝核菌寄主范围大,分布广泛,自然状态下不产生无性孢子,常以菌核形态习居于土壤。根据菌丝融合与否,立枯丝核菌可以划分为14个融合群,其中引起水稻纹枯病的是AG-1-ⅠA融合群。随着农杆菌介导的水稻转基因技术的不断发展,构建T-DNA插入突变体库已成为分析和鉴定基因功能的重要途径。水稻T-DNA插入突变体可以方便地进行正向和反向遗传学的研究,因而将成为进一步克隆抗性相关基因的重要研究材料,以及作为水稻育种新抗源加以利用。抑制差减杂交技术通过有选择地扩增差异表达基因并抑制非目的基因的扩增,来比较同一类细胞在不同生理状态下的基因表达差异,为分析生命活动提供重要信息,作为克隆新基因、研究基因表达的有效工具被广泛应用于从各类生物中筛选差异表达基因,特别是与致病相关的基因。本研究试图从水稻的T-DNA突变体中找到水稻纹枯病的抗性相关基因,主要研究结果如下:1.鉴定了于浙江省各地采集的60株水稻纹枯病菌株的菌丝融合群归属情况。该60个菌株均与AG-1融合群的3个亚群AG-1-ⅠA、AG-1-ⅠB、AG-1-ⅠC的标准菌株融合,当属AG-1融合群。通过离体接种对菌株致病力进行鉴定发现,各菌株间致病力差异显著。进一步的ITS序列分析显示,系统发育树的结果与融合群鉴定的结果一致,与菌株间致病力差异无相关性。2.对日本晴水稻T-DNA突变体库中随机挑选出的2576个材料,首先利用撒施法接种进行了水稻纹枯病抗性鉴定,发现多数为高感材料,抗病及中抗株系共有36个,仅占1.4%,中感株系有180个,占7.0%。再利用嵌入法接种对初筛选出的上述216个株系进行进一步抗性鉴定,筛选出18个抗性表现较好的株系。在温室利用微室法对这18个株系进行进一步抗性鉴定,发现15个突变体株系间抗性差异不显著,然而有17个突变体株系都与野生型有显著差异。3.利用Tail PCR鉴定了1株对水稻纹枯病有特异抗性的日本晴T-DNA突变体的T-DNA插入位点。应用抑制差减杂交(Suppression subtractive hybidi-zation,SSH)技术,构建了该突变体经纹枯病菌诱导表达的正向和反向抑制差减cDNA文库。阳性克隆测序后进行Contig重组,得到了309个cDNA序列。序列经过Blast同源序列比对,219个序列得到了匹配的同源基因,并对同源基因的功能进行了GO分类。