Zhangfei是碱性亮氨酸拉链蛋白家族成员之一,分子量为28.9ku,是参与内质网应激和未折叠蛋白反应调节的转录因子之一,一些肿瘤细胞中也存在未折叠蛋白反应,其在胚胎发育、人类疾病等生理和病理过程中具有重要的意义。为此本试验对Zhangfei融合蛋白进行了诱导表达、纯化并免疫动物,制备并鉴定了Zhangfei蛋白的单克隆抗体,试验结果如下:1筛选了诱导表达Zhangfei融合蛋白的最佳培养条件,证明在37℃摇床培养条件下,IPTG的终浓度为3 mmol/L,诱导时间为7 h时,Zhangfei融合蛋白的表达量相对最大。2比较了谷胱甘肽琼脂糖凝胶和电洗脱两种纯化Zhangfei融合蛋白的方法,得出电洗脱纯化方法得到纯度较高的目的蛋白。3用电洗脱纯化的Zhangfei融合蛋白免疫Balb/c小鼠和家兔,应用间接ELISA常规方法检测血清抗体效价,免疫小鼠的血清抗体效价均超过1∶5×103,免疫兔的血清抗体效价高达1∶3×106,证明Zhangfei融合蛋白有较强的免疫原性。4用45 %PEG(4000)融合骨髓瘤细胞和免疫脾细胞,用间接ELISA法筛选阳性孔,克隆率为98.96 %,阳性克隆率30.18 %。用有限稀释法筛选得到2株阳性杂交瘤细胞,分别命名为ZFD1和ZFD2,两株细胞株分泌单抗均为针对Zhangfei蛋白的单克隆抗体。5应用间接ELISA常规方法检测细胞株培养上清和腹水的阴阳性及其效价,ZFD1杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶1000,腹水单抗的效价为1∶2×105以上。ZFD2杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶1000,腹水单抗的效价为1∶105。经冻存和传代培养证明均具有稳定分泌抗体的能力。2株细胞株分泌的抗体均属于IgG1类型。ZFD1和ZFD2分泌单抗的亲和常数分别为2.102×108,2.313×108。上述结果为检测该蛋白在动物组织细胞中的表达,研究zhangfei蛋白在机体的生理功能提供奠定了基础。