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牛乳头状瘤是由牛乳头瘤病毒（Bovine papillomavirus，BPV）所引起的一种牛体表或部分黏膜发生慢性增生性肿瘤病，世界各地均有该病的发生，因损害皮革质量和降低动物体质而给养牛业造成较大的经济损失。根据BPV L1蛋白基因序列，至今已被鉴定的BPV基因型有13种，还有很多未分类的假定基因型。目前，尚无有效疫苗来预防牛乳头瘤病的发生。新疆是中国五大牧区之一，奶牛存栏数达280万头左右，疑似BPV感染的病例在规模化奶牛场中时常发生，然而至今尚无关于奶牛感染BPV基因分型及其疫苗的研究报道，因此开展新疆地区牛感染BPV的基因分型及BPV疫苗研究具有十分重要的意义。为了弄清新疆北疆地区牛感染BPV的基因型，本研究对新疆北疆地区牛乳头状瘤疑似病料进行了病理组织学检查和PCR检测，并对新疆北疆BPV流行株进行了基因分型。对BPV新疆流行株全基因组进行克隆。将BPV2衣壳蛋白L1基因克隆入原核表达载体pGEX4T-1以及真核表达载体pcDNA3.1(+)中，分别在大肠杆菌表达系统以及BHK-21细胞中诱导表达，对原核表达的重组蛋白进行Western blot鉴定，对真核表达的重组蛋白进行间接免疫荧光检测。本研究首次对新疆北疆地区BPV流行株进行了基因分型，表达了BPV2L1蛋白，为牛乳头瘤病的诊断试剂和疫苗研发奠定了前期基础。研究方法和主要结果如下：1.新疆北疆地区牛乳头瘤病毒的检测及基因分型研究为弄清新疆北疆地区（昌吉、石河子、塔城、伊犁）牛感染BPV的基因型，根据乳头瘤病毒衣壳蛋白L1基因的保守序列设计的简并引物FAP59/FAP64，利用该引物对56份牛乳头状瘤疑似病料进行了病理组织学检查和PCR检测。通过测序、序列比对及遗传进化分析，完成了BPV新疆流行株的基因分型。结果显示，新疆北疆地区56份患病牛皮肤乳头状肿瘤样本中，检测出BPV1、BPV2、BPV3、BPV7、BPV8及一种新型的BPV（BPV/CHI-SW1）。其中37份皮肤肿瘤样本感染BPV1（66.07%），53份皮肤肿瘤样本感染BPV2（94.64%），8份皮肤肿瘤样本感染BPV3（14.29%），5份皮肤肿瘤样本感染BPV7（8.93%），23份皮肤肿瘤样本感染BPV8（41.07%），1份皮肤肿瘤样本感染BPVCHI-SW1（1.79%）。BPV2为北疆地区牛感染的主要基因型。2. BPV2新疆流行株全基因组的克隆及序列分析设计6对BPV2基因型特异性引物，经扩增、测序、拼接、比对后获得BPV2-SW01全基因组序列。该毒株基因组全长7944bp，包括E6、E7、E1、E8、E2、E4、E3、E5、L2、L1共10个开放阅读框（ORF）。遗传进化树分析显示，BPV2-SW01归于Delta乳头瘤病毒属，与BPV-1、BPV-13进化关系最近。3. BPV2新疆流行株L1基因的原核表达研究采用PCR方法从奶牛皮肤肿瘤病料中扩增BPV2新疆流行株L1基因，克隆后测序，并将L1基因亚克隆入原核表达质粒pGEX4T-1中，用IPTG诱导L1蛋白表达，并对重组蛋白进行SDS-PAGE和Westernblot分析。SDS-PAGE分析显示，诱导后能够表达分子量80KD的重组蛋白；Westernblot显示该蛋白可与抗BPV2多克隆抗体发生免疫反应，证实其具有良好的反应原性。4. BPV2新疆流行株L1基因在真核细胞中的表达初步研究采用PCR方法从奶牛皮肤肿瘤病料中扩增BPV2新疆流行株L1基因，以pcDNA3.1(+)为真核表达载体构建重组表达质粒，转染入BHK-21细胞，通过间接荧光免疫试验检测BPV2-L1蛋白的表达。本研究成功构建pcDNA3.1(+)-BPV2-L1重组真核表达质粒，证实能表达出BPV2-L1蛋白，为BPV2DNA疫苗研发提供了前期基础。