环介导等温扩增法检测转基因大豆及其制品的研究

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转基因技术是指通过生物技术使生物品种的性质得到改良的技术。自上世纪八十年代以来,转基因技术经历了迅猛的发展,给人们的生活带来了很大的便利。现在已有许多的转基因物种进入我们的日常生活。但是转基因技术问世至今,在给我们的生活带来益处的同时,关于转基因食品的安全性、生态安全等问题也一直备受关注。许多国家已经出台了相应的法律法规要求对转基因作物及其衍生产品进行标识管理,因此加强对转基因成分的检测愈发重要,只有准确地检测转基因成分,才能有效的对市面上的转基因食品进行监控。本论文建立了用环介导等温扩增法(Loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测转基因大豆及其制品的方法。 LAMP技术是日本的荣研株式会发明的一种新的核酸扩增技术,它是针对靶基因的6个区域设计4条特异性引物,利用一种链置换DNA聚合酶在恒温条件下进行扩增。首先,针对目的基因Lectin、启动子CaMV35S、终止子NOS,以及两个转基因大豆品系GTS40-3-2,MON89788设计引物,筛选得到4对合适的引物。并对LAMP反应体系中的影响因素进行优化,建立5种LAMP反应体系。并对建立的LMAP体系的特异性和灵敏度进行了验证。在本研究中,通过实时浊度仪和加入SYBI Green I染色对LAMP反应结果进行观察。其次,用CTAB法提取豆制品DNA,用PCR和LAMP反应检测。结果:CTAB法能成功提取豆制品DNA。而且PCR与LAMP结果是一致的,说明建立的LAMP方法有很好的准确性。最后,用三种提取方法(CTAB法、试剂盒法以及担体沉淀法)提取大豆油DNA,然后用建立的LAMP方法和荧光PCR反应进行检测。结果:只有担体沉淀法能成功提取到大豆油中DNA,LAMP与荧光PCR的结果一致。这套转基因大豆及其制品中转基因成分的检测体系整体的特异性和灵敏度都能达到欧盟检测标准。该检测方法为转基因快速检测建立了良好的技术平台,同时为下一步制定相关的国家标准和行业标准奠定了基础。
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