目的:1 通过开展前瞻性、多中心队列研究,观察运脾解毒通络祛湿颗粒联合甲氨蝶呤治疗脾虚兼湿毒瘀痹阻证类风湿关节炎的临床疗效及安全性,为中医药治疗活动期类风湿关节炎患者增效减毒作用进行循证评价研究提供可靠数据2通过动物实验,阐释运脾解毒通络祛湿颗粒通过调控m6A甲基化修饰识别蛋白YTHDF2干预CIA模型大鼠的可能作用机制。方法:1.临床观察:采用前瞻性队列研究,共纳入16家中心312例脾虚兼湿毒瘀痹阻证类风湿关节炎患者,以应用运脾解毒通络祛湿颗粒治疗作为暴露因素。其中暴露组166例,采用运脾解毒通络祛湿颗粒结合西药治疗;非暴露组146例采用单纯西药治疗（以甲氨蝶呤为基本药物或联合/不联合其他传统改善病情抗风湿药物的治疗方案）,共计干预24周。在0周、12周、24周三个时间节点进行访视。观察指标:主要结局指标为ACR应答率,次要结局指标为DAS28评分、DAS28缓解率、临床疾病活动指数（CDAI）、疼痛视觉模拟评分、中医证候评分、健康评估调查表（HAQ-DI）、慢性疾病治疗的功能评估-疲劳量表（FACIT-Fatigue）量表,动态红细胞沉降率（ESR）、C-反应蛋白（CRP）、类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）及不良反应。2.动物实验:选取25只SD大鼠通过随机数字表分为5组,每组5只,分为正常对照组、模型组、MTX组,中药组,中西药组。采用Ⅱ型胶原乳化剂造模,选取SD大鼠尾根部一侧皮下注射0.2ml 1mg/ml免疫源,一周后大鼠另一侧尾根部再次注射0.15ml 1mg/ml免疫源加强免疫,建立CIA大鼠模型。并于第一次免疫注射当天开始灌胃给药直至取材,正常对照组与CIA模型组则仅给予等量生理盐水。饲养过程中连续监测大鼠体重变化、关节肿胀度。取材后检测大鼠后肢膝盖关节病例图片,观察局部炎症、炎性细胞侵润、骨质侵蚀等情况;采用Elisa检测大鼠血清中CRP、抗CCP抗体;用Western Blot法检测各组大鼠踝关节中m6A甲基化识别蛋白YTHDF2蛋白的表达,初步探索运脾解毒通络祛湿颗粒对CIA大鼠血清中CRP、抗CCP抗体及踝关节中YTHDF2蛋白的影响。结果:1.临床研究:（1）两组患者基线资料比较:本研究共纳入312例脾虚兼湿毒瘀痹阻证类风湿关节炎完成观察患者,暴露组共166例（男性17例,女性159例）,非暴露组共146例（男性16例,女性130例）,年龄均值为55.45±11.63岁,两组患者基线资料比较无统计学差异。（2）主要结局指标ACR20/50/70应答率:两组受试者ACR应答情况随着药物干预时间的推进逐渐升高。其中暴露组在12周时,ACR20应答率（59.40%）,ACR50应答率（25.30%）,ACR70应答率（6.02%）高于非暴露组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,在24周时,两组未显示出统计学差异。（3）次要结局指标:①DAS28评分:两组DAS28评分随着药物干预时间的推进逐渐降低,其中暴露组在0-12周下降速率和幅度最大。暴露组在12周、24周DAS28评分平均值均低于非暴露组,但差异无统计学意义（P＞0.05）。②中医证候评分:两组受试者中医证候评分随着药物干预时间的推进逐渐降低,与基线相比,两组受试者中医证候评分在12周、24周时均显著降低,其中暴露组在0-12周下降速率和幅度最大。组间比较显示,暴露组中医证候评分平均值在12周（13.80）、24周（10.93）均低于非暴露组（15.44;12.70）,差异均显示出统计学意义（P＜0.05）。③DAS28缓解率:两组受试者DAS28缓解率随着药物干预时间的推进逐渐升高。其中暴露组在12周时,DAS28缓解率（28.31%）均高于非暴露组（19.86%）,差异具有统计学意义（P＜0.05）。④临床疾病活动度指数:两组受试者CDAI评分随着药物干预时间的推进逐渐降低,其中暴露组在0-12周下降速率和幅度最大。在12周时暴露组CDAI（平均值12.34）低于非暴露组CDAI（平均值14.15）,差异具有统计学意义（P＜0.05）;24周时,暴露组CDAI（平均值9.02）低于非暴露组CDAI（平均值10.34）,但差异未展现出统计学意义（P＜0.05）。⑤慢性疾病治疗的功能评估-疲劳:两组受试者FACIT-F评分随着药物干预时间的推进逐渐升高。暴露组中医证候评分平均值在12周（41.10）、24周（43.18）均高于非暴露组（38.61;41.57）,差异均显示出统计学意义（P≤0.05）。⑥关节肿胀:两组受试者关节肿胀数量随着药物干预时间的推进逐渐减少。暴露组关节肿胀数量平均值在12周（2.03）均低于非暴露组（2.91）,差异均显示出统计学意义（P＜0.05）,在24周时未显示出统计学差异。⑦关节压痛:两组受试者关节肿胀数量随着药物干预时间的推进逐渐减少。暴露组关节肿胀数量平均值在12周（3.33）均低于非暴露组（4.67）,差异均显示出统计学意义（P＜0.05）,在24周时未显示出统计学差异。⑧疼痛视觉模拟评分:结果显示,两组受试者疼痛视觉模拟评分随着药物干预时间的推进逐渐降低,但两组在12周与24周均未显示出统计学差异。⑨健康评估问卷残疾指数:两组受试者HAQ-DI评分随着药物干预时间的推进逐渐降低,但两组在12周与24周均未显示出统计学差异。（4）实验室指标评价:两组受试者ESR、CRP、RF值随着药物干预时间的推进逐渐降低,两组在12周与24周均未显示出统计学差异。组内比较显示,与基线相比,ESR、CRP、RF在12周、24周时均降低,且显示出统计学差异（P＜0.05）;在暴露组中抗CCP抗体在24周时显示出降低（P=0.05）。（5）合并用药分析:两组受试者ESR、CRP、RF值随着药物干预时间的推进逐渐降低,两组在12周与24周均未显示出统计学差异。组内比较显示,与基线相比,ESR、CRP、RF在12周、24周时均降低,且显示出统计学差异（P＜0.05）;在暴露组中抗CCP抗体在24周时显示出降低（P=0.05）。（6）安全性指标:两组受试者安全性指标中WBC、RBC、PLT、ALT、AST、Cr在12周、24周时无统计学差异（P＞0.05）。非暴露组HGB在12周、24周时显示出统计学差异（P＜0.05）。暴露组HGB水平在12周（128.01）、24周（129.60）时较基线有所升高,差异具有统计学意义（P＜0.05）,非暴露组未显示统计学差异。（7）不良反应分析:暴露组出现消化道不良反应、骨髓抑制、肝肾损伤及其他不良反应共12例次,发生率7.23%;非暴露组不良反应共28例次,发生率19.18%。两组不良反应发生率存在统计学差异（P＜0.05）。（8）探索性亚组分析:亚组分析中组间比较显示,亚组分析中组间比较显示,在第12周时,暴露组在DAS28评分、CDAI评分、关节肿胀、关节压痛、中医证候评分和ESR低于非暴露组,FACIT-F评分高于暴露组（P＜0.05）;在第24周时,暴露组在DAS28评分、CDIA评分、关节压痛、中医证候评分和ESR低于非暴露组,DAS28缓解率、DAS28低活动率、FACIT-F评分高于非暴露组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。2.动物实验（1）一般情况:在第28天相较于模型组,其余各组大鼠体重增加,（P＜0.05）。与正常对照组相比,模型组大鼠双足后足趾肿胀明显（P＜0.05）,相较与模型组,MTX组、中药组、中西药组大鼠双足后足趾肿胀减轻（P＜0.05）。（2）CIA大鼠踝关节病理情况:正常对照组大鼠踝关软骨平整、光滑,关节间隙正常,未见滑膜组织增生及炎性细胞。与正常对照组相比,模型组大鼠踝关节软骨面缺失平滑、粗糙,存在滑膜组织增生、大量炎性细胞侵润与关节腔内炎性渗出。相较于与模型组,MTX组、中药组、中西药组关节面相对完整,软骨关节面破坏、炎性细胞浸润程度较轻。（3）CIA大鼠血清中相关指标:相较正常对照组,模型组血清CRP、抗CCP抗体含量显著升高（P＜0.01）。相较模型组,MTX组、中药组、中西药组血清中CRP、抗CCP抗体水平有不同程度的降低（P＜0.05）,三组间无统计学意义（P＞0.05）。（4）CIA大鼠踝关节YTHDF2蛋白表达:相较正常对照组,模型组YTHDF2的蛋白表达量显著降低（P＜0.05）。与模型组相比,MTX组、中药组、中西药组YTHDF2蛋白表达升高（P＜0.05）,中药组YTHDF2蛋白表达量升高最为明显,三个治疗组间无统计学意义（P＞0.05）。结论:1 临床研究表明,运脾解毒通络祛湿颗粒结合西药治疗可提高受试者ACR 20/50/70应答率,DAS28缓解率,降低受试者CDAI评分、关节肿胀数量、关节压痛数量,降低受试者中医证候评分,提高受试者FACIT-F评分,改善患者生活状态,减少合并用药与不良反应发生率。2动物实验表明,运脾解毒通络祛湿颗粒可保护CIA模型大鼠滑膜细胞形态,减轻炎性细胞侵润,降低血清中CRP、抗CCP抗体含量,减轻关节炎症,提高CIA模型大鼠踝关节中m6A甲基化识别蛋白YTHDF2蛋白表达量。综上,本研究明确了运脾解毒通络祛湿颗粒结合西药治疗方案治疗脾虚兼湿毒瘀痹阻证类风湿关节炎的临床疗效及安全性,初步验证了运脾解毒通络祛湿颗粒通过调控m6A甲基化识别蛋白YTHDF2干预CIA模型大鼠。