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蜱虫是一类寄生于宿主动物体表的体外寄生虫,在世界范围内广泛分布,其危害是仅次于蚊子的第二大病原传播媒介。蜱可以传播包括血液原虫、细菌以及病毒等多种病原,其中包括部分人畜共患病原。这些经蜱传播的病原不仅危害动物健康及畜牧业的发展,也对人类的健康及公共卫生安全造成严重危害。microRNAs是一类长度约为18～25个核苷酸组成的小分子RNA,不具有编码功能,主要通过与靶基因(mRNAs)的非编码区段(3’-UTR)竞争性结合来诱导靶基因裂解而抑制或者阻碍其翻译,从而在转录后水平上发挥调控作用。MicroRNAs在昆虫发育过程中发挥着重要作用,然而microRNAs对长角血蜱发育相关的功能和机制还知之甚少。为探究长角血蜱中两种microRNAs(miR-125-5p和miR-276-5p)在其发育过程的作用,本试验通过使用高通量测序技术测定了长角血蜱小RNA组(small RNA)和转录组(transcriptome),并结合生物信息学方法对测序后获得的microRNA和转录组数据库进行了分析,预测出了 MARF基因是miR-125-5p和miR-276-5p的一个靶标基因。结合实时定量PCR(RT-PCR)法对2个microRNAs及靶基因在长角血蜱不同发育阶段、不同组织中的表达水平进行了定量分析,初步验证出miR-125-5p和miR-276-5p与MARF基因间存在一定的靶标关系。双荧光素酶体外验证试验结果显示,双荧光的比值与对照组和突变型质粒处理组相比分别下降了44.96%和27.38%;利用RNAi对MARF基因进行了沉默,结果显示MARF基因干扰组与未处理组及阴性对照组相比饱血雌蜱的生理指标明显发生改变,饱血时间及产卵时间分别延长了2～4d,饱血体重和产卵重分别降低了128.81mg和36.13mg,产卵个数减少约591枚;通过活体显微注射microRNA激动剂(agomir)对长角血蜱的miR-125-5p及miR-276-5进行了过表达,结果显示饱血雌蜱生理指标与未处理组和阴性对照组也发生明显改变,miR-125-5p过表达组的饱血时间及产卵时间分别延长了 1d～3d,饱血体重和产卵重减少了 77.67mg和23.43mg,产卵个数减少了约251枚;miR-276-5p过表达组的饱血时间及产卵时间分别延长了2～3d,而饱血体重和产卵重分别减少了 99.74mg和54.01mg,产卵个数减少了约396枚,miR-125-5p和miR-276-5p同时过表达组的饱血时间及产卵时间分别延长了 3～4d,而饱血体重和产卵重分别减少了 125.86mg和56.64mg,产卵个数减少了约585枚。通过活体注射microRNAs抑制剂(antagomir)和ds-MARF进行基因回补试验,结果显示同时注射microRNAs(antagomir)+ds-MARF的长角血蜱表型基本恢复正常。表明:在长角血蜱中,MARF 是 miR-125-5p 和 miR-276-5p 的一个靶标基因。miR-125-5p 和miR-276-5p在长角血蜱的发育过程中发挥着重要的调控作用,干扰MARF基因后长角血蜱的饱血和产卵受到明显的抑制,miR-125-5p和miR-276-5p通过负调控MARF基因来调控长角血蜱的发育进程。