论文部分内容阅读
背景:中性粒细胞在支气管哮喘中受到广泛重视,其通过脱颗粒及释放炎性因子等参与气道炎症反应,但机制仍不完全清楚。α防御素是主要存在于中性粒细胞内的一类阳离子抗菌肽。研究报道,作用于中性粒细胞膜表面P2Y2受体促进中性粒细胞脱颗粒参与炎症反应。目的:探讨α防御素在支气管哮喘中表达情况及P2Y2受体对其影响。方法:实验共分两部分。动物实验部分:72只健康雄性豚鼠随机分为对照组(C)、哮喘组(A);卵蛋白致敏复制哮喘豚鼠模型,用生理盐水替代卵蛋白作为对照组;再将对照组和哮喘组分成:生理盐水组(C1/A1)、ATP干预组(C2/A2)、苏拉明干预组(C3/A3),分别腹腔注射生理盐水、ATP25mg/kg及苏拉明7.5mg/kg,20小时后获取标本,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数并对嗜酸性粒细胞及中性粒细胞计数;检测豚鼠血浆中白介素-8(IL-8)和α防御素(RNP)及肺组织中P2Y2和RNPmRNA表达水平。细胞实验部分:选取支气管哮喘急性发作期患者和健康志愿者外周血分离中性粒细胞作为标本,分别进行干预后培养(P2Y2受体诱导剂ATP和拮抗剂苏拉明);检测细胞上清液中IL-8,HNP1-3以及中性粒细胞中P2Y2受体蛋白及mRNA表达水平。结果:(一)动物实验部分结果(1)A1组BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞及中性粒细胞数目显著多于C1组(P<0.05);A1组BALF中细胞总数及中性粒细胞数目与A3组比较亦增多,较A2组降低(P<0.05);C组组内比较,无统计学差异(P>0.05)。(2)A1组豚鼠血浆和肺组织中RNP蛋白及mRNA表达较C1组增高,与A2组比较降低,较A3组增高(P<0.05);C1组较C2组比较降低,与C3组比较增高(P<0.05)。(3)A1组豚鼠血浆中IL-8表达较C1组增高,与A2组比较降低,较A3组增加(P<0.05);C组组内比较,无统计学差异(P>0.05)。(4)P2Y2mRNA表达结果与其干预有关。C1组和A1组肺组织P2Y2mRNA表达较其各自ATP干预组降低,与苏拉明干预组比较增高(P<0.05);A1组肺组织P2Y2mRNA表达较C1组增高(P<0.05)。(5)豚鼠α防御素与RL、中性粒细胞及IL-8呈正相关(P<0.05)。(二)细胞实验部分结果(1)哮喘组患者分离培养中性粒细胞中HNP1-3蛋白及mRNA表达较对照组增高,与哮喘ATP干预组比较降低,较哮喘苏拉明干预组增高(P<0.05);对照组较其ATP干预组比较降低,与苏拉明干预组比较增高(P<0.05)。(2)哮喘组分离的中性粒细胞P2Y2mRNA及蛋白、IL-8表达较正常组增高(P<0.05)。(3)P2Y2mRNA及蛋白表达结果与其干预有关,正常组和哮喘组分离的中性粒细胞P2Y2mRNA及蛋白表达较其各自ATP干预组降低,与苏拉明干预组比较增高(P<0.05)。结论:1. α防御素在支气管哮喘中表达增加。2. P2Y2受体在支气管哮喘中表达上调诱导中性粒细胞脱颗粒促使α防御素表达增加从而参与气道炎症反应。