论文部分内容阅读
目的:本课题主要用鸦胆子苦醇联合2Gy X射线辐照肺癌A549细胞株,研究对A549细胞的凋亡、ROS、迁移和侵袭的生物学特性,初步探讨鸦胆子苦醇联合2Gy X射线与肿瘤细胞转移的可能分子机制。方法:肺癌A549细胞经过鸦胆子苦醇联合2Gy X射线辐照后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率和ROS变化;应用划痕实验检测对A549细胞迁移率的影响;用Transwell小室检测对A549细胞侵袭影响变化;用实时定量PCR法和Western blotting检测Nrf2、MMP-2、E-cadherin mRNA和蛋白表达水平变化。结果:鸦胆子苦醇不同浓度对A549增殖影响成反比,随着浓度的增加,增殖明显降低,抑制率明显升高。同一浓度鸦胆子苦醇随着时间的延长,Nrf2表达逐渐降低,24h时最为明显。本论文选取60nM鸦胆子苦醇联合2Gy射线辐照A549细胞,分为对照组、药物组、射线组和联合组。细胞克隆形成率和检测细胞凋亡结果相一致,显示与对照组相比较药物组、射线组及联合组均有统计学意义,可以降低细胞存活,抑制细胞生长,促进细胞凋亡,联合治疗较药物组和射线组更加显著(p<0.05),鸦胆子苦醇可以提高辐射敏感性。通过流式细胞仪检测ROS显示与对照组相比较,药物组和射线组荧光强度高区域的细胞明显增多,联合组的细胞频率向右侧高强度区偏移最明显。通过划痕实验检测对A549细胞迁移率和Transwell小室检测细胞侵袭力,显示联合组相比较对照组和射线组有统计学意义,可以减低细胞的迁移率和侵袭数。用实时定量PCR法和Western blotting检测Nrf2、MMP-2、E-cadherin mRNA和蛋白表达水平变化,药物组和联合组结果相似,可以抑制Nrf2、MMP-2表达,上调E-cadherin表达,相比较对照组有统计学意义(p<0.05)。结论:鸦胆子苦醇联合2Gy X射线辐射A549细胞后,细胞凋亡和ROS明显增加;降低细胞迁移率和侵袭力,可以调节转移因子MMP-2、E-cadherin表达水平来调控细胞的侵袭迁移,并发现与Nrf2表达水平成相关性。综上所述鸦胆子苦醇可以作为辐射增敏剂,促进细胞凋亡,并可以抑制A549细胞侵袭迁移。为进一步实验室研究提供数据支持,为临床应用提供理论依据。