化瘀消瘤方含药血清对人肺癌A549细胞Fas/Fasl表达的影响

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目的:本实验运用血清药理学的方法,通过观察化瘀消瘤方含药血清对人肺癌A549细胞Fas和FasL表达的影响,探讨化瘀消瘤方含药血清对人肺癌细胞凋亡的诱导作用及其机制,为临床应用化瘀消瘤方治疗肺癌提供理论依据。方法:(1)健康家兔20只,雄性,随机分5组,每组4只。用不同剂量的化瘀消瘤方水煎剂给家兔灌胃,通过颈动脉采血,分离血清,制备高、中、低剂量化瘀消瘤方含药血清及全反式维甲酸血清和生理盐水对照血清。(2)以高、中、低剂量化瘀消瘤方含药血清,全反式维甲酸血清和对照血清分别作用于人肺腺癌细胞系A549细胞。(3)上述各组合药血清分别作用24h、48h后,应用倒置相差显微镜分别对细胞生长和凋亡进行动态形态学观察;HE染色光镜观察用药前后A549细胞形态变化;免疫组化sP法检测A549细胞Fas和FasL的表达。结果:(1)倒置显微镜观察,A549细胞排布紧密,贴壁生长,细胞为多边形,细胞透亮、饱满;细胞密集,相邻细胞有细胞重叠现象;经低剂量化瘀消瘤方含药血清作用后,A549细胞数目减少,但形态学改变不明显。经中、高剂量化瘀消瘤方含药血清及RA组处理24h后,则出现一定程度的形态学改变,表现为细胞稀疏,胞突回缩,细胞体积变小、变圆形;重叠生长现象减少,细胞数目减少;胞浆透亮度下降,颗粒感增强;部分细胞脱落呈悬浮状,并见细胞碎片,上述变化在48h后更明显。(2)HE染色光镜观察,可见经含化瘀消瘤方的兔血清作用后,A549细胞体积变小、变圆形,细胞稀疏,细胞间隙增大;胞膜皱缩,细胞核大小不等,形态不规则,胞核内染色质密度增高,呈半月形或环形凝集在核膜周边,显示典型的凋亡细胞形态,其中以高剂量含药血清组最多。不含药血清组细胞核完整,未见凋亡形态细胞。(3)免疫组织化学染色显示,化瘀消瘤方含药血清可上调A549细胞Fas的表达(P<0.05),下调A549细胞FasL的表达(P<0.05)。化瘀消瘤方含药血清作用24h、48h后,高剂量化瘀消瘤方含药血清组和ATRA组与对照血清组之间Fas的表达均有统计学意义(P<0.05),且Fas的表达均随含药血清剂量的增加和作用时间的延长而增强。化瘀消瘤方含药血清作用24h、48h后,中、高剂量化瘀消瘤方含药血清和ATRA组与对照血清组之间FasL的表达均有统计学意义(P<0.05),且FasL的表达均随含药血清剂量的增加和作用时间的延长而减弱。结论:本实验表明化瘀消瘤方含药血清可以上调肺癌A549细胞Fas的表达和下调其FasL的表达,并存在一定的量效关系,提示该方可能通过干扰细胞凋亡的信号转导而诱导癌细胞的凋亡,抑制肿瘤的生长,为化瘀消瘤方的抗癌机制提供了科学的实验依据。
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