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目的:日常生活中,长期饮茶人群中的牙齿表面有色素沉积,尤其是牙齿窝沟处着色更深,于是猜想茶叶中的成分对牙面有附着作用,且这种附着作用可以减少牙面和食物接触时间及细菌的附着从而起到保护牙面的效果。研究显示儿童龋齿主要发生于牙面中的窝沟点隙内,故本课题以牙面中的窝沟为观察对象。本课题的前期实验表明:相比于白茶、绿茶、乌龙茶,红茶有效成分在年轻恒牙窝沟处的附着效果最好,并且窝沟处的色素附着量和红茶的浓度在一定范围内成正比,但茶在窝沟附着的色素与龋坏导致的颜色相似,在临床视诊时易造成误诊。口腔中常用的菌斑显示剂碱性品红颜色鲜艳可用于茶在窝沟附着后色素的改变,本实验通过研究红茶附着窝沟后颜色改变及稳定性等问题,探讨红茶作为保护窝沟的方法的可行性。方法:1、培养人牙龈成纤维细胞,加入96孔板中,含有红茶溶液的培养液(茶水比1:50、1:100、1:200、1:400、1:800)或含有碱性品红溶液的培养液(0.04 mg/ml、0.02 mg/ml、0.01 mg/ml、0.005 mg/ml、0.0025 mg/ml)加入96孔板内,加入CCK-8试剂,酶标仪测量吸光度值,计算细胞相对增殖率。2、茶水比1:100的红茶溶液和0.0025 mg/ml的碱性品红溶液以去离子水为参比溶液,分光光度计测量0 h、24 h、48 h的吸光度,绘制吸收曲线。3、将前磨牙样本浸泡于唾液中2 h后,茶水比1:100的红茶溶液涂于样本窝沟,反复50次,工具测量显微镜下测量窝沟内附着厚度,记录照片。0.0025 mg/ml的碱性品红溶液涂于样本窝沟,工具测量显微镜下测量红茶和碱性品红的附着厚度,记录照片。钨灯丝扫描电镜观察窝沟中红茶和碱性品红的附着情况,扫描电镜的能谱仪分析窝沟内元素成分和含量。4、将前磨牙样本浸泡于唾液中2 h后,茶水比1:100的红茶溶液涂于样本窝沟,反复50次,0.0025 mg/ml的碱性品红溶液涂于样本窝沟,将样本进行500个冷热循环周期,工具测量显微镜下测量冷热循环前后红茶和碱性品红的附着厚度,记录照片。结果:1、0.04 mg/ml、0.02 mg/ml、0.01 mg/ml的碱性品红溶液作用于HGF 12h、24 h、48 h后,RGR界于31.396%~73.658%,细胞毒性分级2或3级,评价为轻中度细胞毒性,三个组分别和其余组比较RGR均有显著差异。0.005 mg/ml、0.0025 mg/ml的碱性品红溶液作用于HGF 12 h、24 h、48 h后,RGR界于80.418%~103.837%,细胞毒性分级为0或1级,评价为无细胞毒性。两组的RGR无显著差异。茶水比例为1:50的红茶溶液作用于HGF 12 h、24 h、48 h后,RGR界于55.568%~66.617%,细胞毒性分级为2级,评价为轻度细胞毒性,茶水比例为1:100、1:200、1:400、1:800的红茶溶液作用于HGF 12 h、24 h、48 h后,RGR界于79.991%~103.424%,细胞毒性分级为0或1级,评价为无细胞毒性。茶水比例为1:100红茶溶液、茶水比例为1:50红茶溶液分别和其余组比较RGR有显著差异,茶水比例为1:200、1:400、1:800红茶溶液的RGR无显著差异。2、茶水比1:100的红茶溶液的最大吸收波长为320 nm,0.0025 mg/ml的碱性品红溶液的最大吸收波长为540 nm,两者等体积混合液的最大吸收波长为300nm。茶水比1:100红茶溶液0 h、24 h、48 h的最大吸收波长为320 nm。0.0025mg/ml碱性品红溶液0 h、24 h、48 h的最大吸收波长为540 nm。茶水比1:100红茶溶液和0.0025 mg/ml碱性品红溶液等体积混合液0 h、24 h、48 h的最大吸收波长为300 nm。3、无附着物的V型窝沟、U型窝沟、IK型窝沟、I型窝沟内洁净无颜色,红茶溶液涂抹后四种窝沟出现褐色物质附着,四种窝沟褐色附着物厚度有显著差异。红茶溶液涂抹的四种窝沟再涂碱性品红溶液后窝沟内出现了紫红色。红茶溶液涂抹的四种窝沟在涂碱性品红溶液前后的附着物厚度有显著差异。四种窝沟红茶溶液和碱性品红溶液先后涂抹后的附着物厚度有显著差异。SEM放大100倍下V型窝沟和U型窝沟内附着物不明显,IK型窝沟和I型窝沟内附着物明显但不连续。SEM放大500倍下V型窝沟和U型窝沟内附着物较明显,V型窝沟、U型窝沟、IK型窝沟、I型窝沟内附着物与釉质结合紧密,两者界限不明显,附着物致密可见少许裂痕。窝沟釉质层的点能谱图包含P、Ca、C、K四个主峰,窝沟附着物红茶层的能谱图包含C、Ca、O三个主峰外还可观察到小峰P和Cl,窝沟附着物碱性品红层的能谱图在C、K、Ca、O主峰外可观察到小峰Si和Al。4、涂抹红茶溶液和碱性品红溶液的V型窝沟、U型窝沟、IK型窝沟、I型窝沟内紫红色在冷热循环后基本褪去,留有褐色附着物和少许紫红色,冷热循环前后的窝沟附着物厚度有显著差异。结论:低浓度碱性品红溶液和低茶水比例红茶溶液作用于体外培养的人牙龈成纤维细胞无细胞毒性。红茶溶液和碱性品红溶液可反应形成新物质且新物质在一定时间内相对稳定。红茶和碱性品红可附着在窝沟内,不同窝沟附着物厚度有差异。碱性品红可改变红茶附着窝沟后的颜色,但稳定性有待进一步验证。