【摘 要】
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目的:从噬菌体随机展示的肽文库中,筛选与受损内皮细胞特异性结合的多肽;研究其对内皮细胞/单核细胞黏附率的影响,探讨其抗黏附作用机制,为开发抗黏附的新型肽类药物提供实验
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目的:从噬菌体随机展示的肽文库中,筛选与受损内皮细胞特异性结合的多肽;研究其对内皮细胞/单核细胞黏附率的影响,探讨其抗黏附作用机制,为开发抗黏附的新型肽类药物提供实验依据.方法:(1)用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL:100μg/mL)与内皮细胞孵育4小时,建立内皮细胞损伤模型;(2)以受损的内皮细胞作为筛选的"靶"细胞,以正常内皮细胞作为非特异性噬菌体吸附细胞;采用细胞筛选技术,经过"吸附"-"洗脱"-"扩增"的重复过程,将与受损内皮细胞特异结合多肽,从噬菌体展示的肽文库中筛选出来;(3)用ELISA法鉴定部分阳性克隆,经DNA序列测定确定其插入的氨基酸序列;(4)分别以不含多肽的噬菌体、含特异性多肽的噬菌体与内皮细胞孵育,并同时加入ox-LDL(100μg/mL),培养4小时,计数法检测内皮细胞/单核细胞的黏附率;(5)以硝酸还原酶法测定抗黏附噬菌体多肽对细胞培养液中NO含量的影响,用Western Blot检测其对内皮细胞ICAM-1、Caveolin-1表达及eNOS、NF-кB活性的影响,初步探讨噬菌体多肽的抗黏附作用机制.结论:1、用噬菌体展示技术从XCX<,15>肽文库中,初步鉴定出能与受损内皮细胞特异性结合的多肽6个,其中1个重复出现的多肽具有较明显的抗内皮细胞/单核细胞黏附作用.2、初步证实备选多肽的抗黏附作用可能与其调节Caveolin-1/NO/NF-кB信号通路有关.
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