背景霍山石斛是兰科石斛属多年生草本植物,是传统补阴药石斛中的一种,具有久嚼无渣,个头沉实,药效最佳的特点,是药用石斛中的极品,有“中华仙草之首”的美誉,但由于其地域分布狭小,自然繁殖困难,加上过度采挖和生态环境破坏等因素,野生霍山石斛资源极度匮乏,导致对其药理作用的研究尚未全面展开,目前尚未被《中国药典》明确收录,不利于霍山石斛的临床合理应用与发展。随着霍山石斛人工栽培技术的不断成熟和产量的逐年增加,对其药理作用的进行深入研究必要且有现实意义。石斛具有良好的补益作用,目前研究发现,霍山石斛具有抗衰老、抗肺炎、降血脂、保肝、增强免疫力、抗氧化、降血糖等作用,但对于霍山石斛抗疲劳作用研究的报道尚未报道,并且根据霍山石斛药性特点探讨其功效内涵的研究较少,对于其发挥主要功效作用的物质基础和作用机制还不明确。因此,本课题在中医理论的指导下,采用现代药理学研究方法,以霍山石斛历史应用情况为基础,以证测性,对霍山石斛的寒热药性进行验证,基于性效相关探讨霍山石斛补虚功效。目的本课题首先在对石斛应用特点及霍山石斛历代应用情况的基础上,以铁皮石斛和六味地黄丸为阳性对照,通过研究霍山石斛对阴虚证小鼠机体状态及寒热指标的影响,验证霍山石斛的寒凉药性,通过对阴虚小鼠运动能力、物质代谢和能量代谢的影响,探讨霍山石斛滋阴补虚功效及抗疲劳作用。其次,在以上研究的基础上,以具有补气养阴,清热生津功效的西洋参和味甘微温,大补元气的人参为对照药,通过比较霍山石斛原粉、醇提物、水提物对肾阴虚及肾阳虚小鼠生物学效应、物质代谢及能量代谢的影响,对霍山石斛滋阴补虚功效及抗疲劳作用的物质基础及作用机制进行研究,为明确霍山石斛的药性及功效,促进其合理应用提供参考。方法1.霍山石斛药性验证及抗疲劳作用研究SPF级健康雄性昆明小鼠适应性喂养7天后随机分为正常组,阴虚模型组,六味地黄丸组,铁皮石斛组,霍山石斛A（0.33g/kg）、B（1g/kg）、C（2g/kg）和 D（3.0g/kg）剂量组,连续灌服甲状腺素（160mg/kg）14天制备肾阴虚证动物模型,以铁皮石斛和六味地黄丸为对照,连续给药14天。1.1霍山石斛对肾阴虚小鼠环核苷酸及甲状腺激素的影响给药第13天,观测各组小鼠的温度趋向性,给药第15天脱颈椎处死动物,摘眼球取血离心血清,酶联免疫吸附法检测血清cAMP和cGMP,计算cAMP/cGMP 比值,放免法检测血清T3、T4水平。1.2霍山石斛对肾阴虚证小鼠抗疲劳及能量代谢的影响给药第14天30 min后进行负重游泳实验,记录力竭游泳时间;给药第15天脱颈椎处死动物,摘眼球取血离心血清,比色法检测血清BLA、BUN、FFA、TG、CK水平;紫外分光光度法分别检测LDH、Na+-K--ATP酶和Ca2+-ATP酶含量,根据试剂盒方法分别检测肝糖原和肌糖原的含量。2.霍山石斛不同提取物药性探讨及抗疲劳作用研究雄性昆明小鼠180只,适应性喂养7天后随机分为15组,即正常组、肾阴虚证模型组、阴虚+西洋参组、阴虚+霍山石斛原粉组、阴虚+霍山石斛醇提低剂量组、阴虚+霍山石斛醇提高剂量组、阴虚+霍山石斛水提低剂量组、阴虚+霍山石斛水提高剂量组,肾阳虚证模型组、人参组、阳虚+霍山石斛原粉组、阳虚+霍山石斛醇提低剂量组、阳虚+霍山石斛醇提高剂量组、阳虚+霍山石斛水提低剂量组、阳虚+霍山石斛水提高剂量组。以分别连续灌服甲状腺素（160mg/kg）、氢化可的松溶液（25mg/kg）制备阴虚动物和阳虚动物模型,给药14天。2.1霍山石斛不同提取物对肾阴虚、肾阳虚小鼠环核苷酸及甲状腺激素的影响给药第13天,观测各组小鼠的温度趋向性,给药第15天脱颈椎处死动物,摘眼球取血离心血清,酶联免疫吸附法检测血清cAMP和cGMP,计算cAMP/cGMP比值,放免法检测血清T3、T4水平。2.2霍山石斛不同提取物对肾阴虚、肾阳虚抗疲劳及能量代谢的影响给药第14天30 min后进行负重游泳实验,记录力竭游泳时间;比色法检测血清BLA、BUN、FFA、TG、CK水平;紫外分光光度法分别检测LDH、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶含量,根据试剂盒方法分别检测肝糖原和肌糖原的含量。结果1.霍山石斛对肾阴虚小鼠环核苷酸及甲状腺激素的影响与模型组相比,霍山石斛组B、C和D剂量组小鼠的阴虚状态得到改善,体质量明显升高（P<0.001,P<0.01）,热区停留比例明显增高（P<0.001）,cAMP、cAMP/cGMP明显降低（P<0.01,P<0.001）,血清 T3、T4 显著降低（P<0.05,P<0.01,P<0.001）。2.霍山石斛对肾阴虚证小鼠抗疲劳及能量代谢的影响与模型组相比,霍山石斛组B、C和D剂量组小鼠的力竭游泳时间均明显提高（P<0.001）,肝糖原和肌糖原含量明显增加（P<0.001,P<0.01）,血清BLA、FFA、BUN 和 TG 明显降低（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,LDH 明显升高（P<0.001）,CK、Na+-K+-ATP 酶和 Ca2+-ATP 酶明显降低（P<0.001）。3.霍山石斛不同提取物对肾阴虚证、肾阳虚证小鼠环核苷酸及甲状腺激素的影响与阴虚模型组相比,霍山石斛水提物低、高剂量组及霍山石斛醇提物低、高剂量组小鼠的体质量明显增加（P<0.01,P<0.001,P<0.05）,热区停留比例明显升高（P<0.01,P<0.001）,血清cAMP明显降低（P<0.05,P<0.001,P<0.01）,血清T4水平明显降低（P<0.05,P<0.001,P<0.01）;霍山石斛水提物高剂量组及霍山石斛醇提物高剂量组小鼠的自主活动和精神状态明显改善,cAMP/cGMP值明显降低（P<0.01,P<0.001）,血清T3水平明显降低（P<0.001,P<0.05）。与阳虚模型组相比,霍山石斛水提物高剂量组小鼠的自主活动和精神状态明显改善,体质量明显增加（P<0.01）,热区停留比例降低（P<0.05）,cAMP/cGMP值明显降低（P<0.05）,T3、T4值明显升高（P<0.001,P<0.05）,阳虚+霍山霍山石斛水提物低剂量组小鼠的T3值升高（P<0.05）。4.霍山石斛不同提取物对肾阴虚证、肾阳虚证小鼠抗疲劳作用及能量代谢的影响与阴虚模型组相比,霍山石斛水提物低、高剂量组及霍山石斛醇提物低、高剂量组小鼠的肌糖原含量明显增加（P<0.05,P<0.001,P<0.01）,FFA、BUN和TG水平明显降低（P<0.01,P<0.001）,LDH 活性升高（P<0.01,P<0.001）,CK 和 Na+-K+-ATP酶活性降低（P<0.001,P<0.01）;与模型组相比,霍山石斛水提物高剂量及霍山石斛醇提物高剂量组小鼠的力竭游泳时间明显升高（P<0.001）,肝糖原含量增加（P<0.001）,血清BLA水平降低（P<0.01）,Ca2+-ATP酶活性明显降低（P<0.001）。与阳虚模型相比,霍山石斛水提物高剂量组小鼠的力竭游泳时间明显升高（P<0.001）,肝糖原、肌糖原明显升高（P<0.001,P<0.01）,BLA值降低（P<0.001）,FFA、BUN、TG 值明显升高（P<0.05,P<0.001,P<0.01）,CK、LDH、Na+-K+-ATP 酶值明显升高（P<0.05,P<0.01,P<0.001）。结论1.霍山石斛能改善小鼠的阴虚状态,调节阴虚状态下紊乱的环核苷水平及甲状腺激素水平,其作用趋势与铁皮石斛和六味地黄丸一致,表现出寒凉药性。2.霍山石斛能通过调节阴虚疲劳小鼠能量代谢酶含量,增加代谢产物的清除速率,增加糖原储备而提高阴虚状态下机体的运动能力,表现出滋阴补虚的功效特点,其作用趋势与铁皮石斛和六味地黄丸一致,其机制可能与降低阴虚状态下过快的能量消耗速率,加快代谢产物清除有关。3.霍山石斛水提物对阴虚证和阳虚证的机体状态、环核苷酸水平及甲状腺激素水平均有调节作用,表现出平性药“条件显性,双向适用”的药性特点。霍山石斛醇提物仅对阴虚证的机体状态、环核苷酸水平及甲状腺激素水平有调节作用,表现出寒凉药性,是霍山石斛寒凉药性的物质基础。4.霍山石斛水提物均能提高阴虚证、阳虚证小鼠的抗疲劳作用,具有双向调节作用,其机制为降低阴虚状态下过快的能量消耗并提高对代谢产物的清除,提高阳虚状态下过慢的能量消耗速率并提高对代谢产物的清除速率,是霍山石斛补虚及抗疲劳作用的主要物质基础。霍山石斛醇提物仅能增强阴虚证疲劳小鼠的运动能力,其作用机制为降低阴虚状态下过快的能量消耗并提高对代谢产物的清除,符合寒凉药性的作用特点,是霍山石斛滋阴清热抗疲劳作用的主要物质基础。