肿瘤作为对人类危害最大的慢性疾病之一,其发病率逐年增高。随着对癌症的不断研究发现,癌症的发生与细胞内蛋白质表达量异常或结构的改变相关。Legumain,一种溶酶体蛋白酶,亦称天冬酰胺内肽酶,被发现在很多人源肿瘤组织中高表达并且促进肿瘤细胞的侵袭能力,因此开发Legumain小分子抑制剂有望成为治疗肿瘤的新手段。本论文取得的研究结果包括:(1)表达重组Legumain蛋白,结果显示由大肠杆菌表达系统表达的Legumain没有活性。随后选择毕赤酵母X33表达系统进行表达,由于Legumain蛋白在酸性条件下会发生自切现象,因此对Legumain表达的发酵液pH进行了调整,结果显示通过氨水调节发酵pH到6时Legumain表达量增加,且后期检测活性最高。通过SDS-PAGE以及活性检测验证了 Legumain的最适切割pH为3;(2)利用Legumain蛋白酶特异性切割荧光底物(Z-Ala-Ala-Asn-AMC)建立了 Legumain小分子抑制剂的筛选体系,在小分子化合物库中筛选出6个Legumain抑制剂,其中Esomeprazole magnesium抑制效果最好;(3)通过MTT实验检测小分子抑制剂对MDA-MB-231的细胞毒性,结果显示毒性均很小;(4)通过 Transwell 试验检测 Legumain 小分子抑制剂 Esomeprazole magnesium 对 MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响,结果显示随着Esomeprazole magnesium浓度的增加,MDA-MB-231细胞侵袭能力减弱。(5)通过裸鼠转移模型检测Esomeprazole magnesium对乳腺癌细胞转移的抑制作用,结果显示随着小鼠腹腔注射药物浓度的增加,肺部乳腺癌细胞转移结节数减少,HE染色也证实该结果,表明Esomeprazole magnesium可以抑制乳腺癌细胞向小鼠肺部转移。综上所述,Esomeprazole magnesium可以明显抑制Legumain蛋白酶活性,并抑制乳腺癌细胞的转移,本研究为研发抑制肿瘤转移的药物提供新的策略。