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【目的】探讨LEF1在肝细胞癌中是否调控CDC20的表达,并研究其对肝癌细胞增殖、凋亡和周期的影响。【方法】(1)qRT-PCR及western blot检测人肝癌细胞Huh-7、HepG2和SMMC-7721中LEF1和CDC20的表达;(2)ChIP检测转录因子LEF1与CDC20启动子区域结合;(3)双荧光素酶报告基因检测系统检测过表达LEF1后CDC20启动子活性;(4)在线预测软件PROMO预测CDC20启动子区域可能和转录因子LEF1结合的位点,设计、合成和标记探针,EMSA检测CDC20启动子区与LEF1特异结合位点;(5)构建LEF1过表达慢病毒载体和LEF1干扰慢病毒载体,与相应空载体分别转染LEF1相对低表达肝癌细胞株HepG2和LEF1相对高表达肝癌细胞株Huh-7,荧光显微镜观察转染效率,qRT-PCR及western blot检测转染后LEF1和CDC20的表达;(6)克隆形成实验检测转染后细胞増殖能力;(7)AnnexinV-PE/7AAD法检测转染后细胞的凋亡水平;(8)DAPI染色检测转染后细胞的周期改变。(9)对LEF1稳定过表达的HepG2干扰CDC20,再次分别检测细胞增殖、凋亡和周期改变。【结果】(1)LEF1表达在Huh-7相对较高,HepG2的LEF1表达相对较低;(2)ChIP-PCR显示,Huh-7细胞中转录因子LEF1能与CDC20DNA启动子区结合;(3)转染pcDNA3.1-LEF1后CDC20启动子报告基因荧光素酶相对活性显著增加(p<0.05);(4)生物信息学方法预测显示CDC20转录上游1.6kb可能和LEF1结合的位点有5个,分别标记为Site1-5,合成并标记4组探针Probe1-4以及未标记探针和突变探针,EMSA显示Probe1的Site1-2位点与LEF1特异结合;(5)转染LV-LEF-1cDNA细胞的LEF1和CDC20的mRNA、蛋白表达水平显著增高(P<0.05),而转染LV-LEF1siRNA细胞LEF1和CDC20的mRNA、蛋白表达水平降低(P<0.01);(6)与对照组相比,LEF1过表达后HepG2细胞增殖显著增高(P<0.05),干扰后Huh-7细胞增殖显著降低(P<0.05);(7)LEF1过表达后HepG2细胞凋亡显著降低(P<0.01),干扰后Huh-7细胞凋亡显著增高(P<0.01)。(8)LEF1过表达后HepG2细胞G2/M期细胞显著增加(P<0.01),干扰后Huh-7细胞G2/M期细胞显著减低(P<0.01)。(9)LEF1稳定过表达后HepG2细胞干扰CDC20后,HepG2细胞增殖显著降低(P<0.01),凋亡增加(P<0.01)且细胞周期改变(P<0.01)。【结论】(1)转录因子LEF1通过与CDC20启动子区域结合在肝癌细胞中调控CDC20的表达;(2)LEF1转录激活CDC20可影响肝癌细胞的生物学行为,促进细胞增殖和抑制细胞凋亡,并导致G1/S期细胞比例减少和G2/M期比例增加,明显影响细胞周期进程。