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目的:1.建立龙利叶乙酸乙酯部位鉴别、检查、含量测定和指纹图谱的研究方法。2.比较不同产地龙利叶乙酸乙酯部位的抗炎药效。3.建立不同产地龙利叶乙酸乙酯部位指纹图谱与抗炎药效之间的关系(抗炎谱效关系),进而阐明其抗炎药效的物质基础。4.分析鉴定该部位可能含有的化学成分,为其进一步的研究与开发提供参考。方法:1.对10批龙利叶乙酸乙酯部位进行薄层鉴别和红外光谱鉴别。2.参照《中国药典》(2015年版)第四部通则进行水分、灰分以及残留溶剂的检测。3.采用高效液相色谱法对龙利叶乙酸乙酯部位中原儿茶酸和咖啡酸进行含量测定。4.采用HPLC法建立10批不同产地龙利叶乙酸乙酯部位的指纹图谱,通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012.1版软件对10批样品进行共有峰确认及相似度评价。运用SPSS22.0统计学软件对HPLC指纹图谱进行聚类分析和主成分分析。5.采用二甲苯致小鼠耳肿胀模型来研究不同产地龙利叶乙酸乙酯部位的抗炎效果。6.通过灰色关联度法和偏最小二乘回归分析法来建立龙利叶乙酸乙酯部位抗炎谱效关系,从而探讨其抗炎物质基础。7.采用UPLC-Q Exactive四级杆-静电场轨道阱高分辨液质联用技术,对龙利叶乙酸乙酯部位-抗炎活性部位进行化学成分分析,为其化学成分及药效物质的研究提供参考。结果:1.确定了龙利叶乙酸乙酯部位薄层色谱和红外光谱鉴别方法。2.测定了龙利叶乙酸乙酯部位水分和灰分的含量并暂定其限度,残留溶剂的检测结果显示10个产地均未检测到石油醚,其乙酸乙酯、乙醇含量均低于0.5%,符合《中国药典》(2015版)规定的限量要求。3.含量测定方法学考察结果显示,龙利叶乙酸乙酯部位中原儿茶酸和咖啡酸分别在2.00μg/m L~139.91μg/m L、2.00μg/m L~140.01μg/m L范围内呈良好的线性关系(r=0.9997,n=5),各色谱峰间分离度均达到定量要求。其精密度,稳定性,重复性均良好,且RSD%均小于3%,平均加样回收率为97.52%~102.46%,RSD%在1.03%~1.76%之间(n=9),参数均达到定量分析要求。4.建立了龙利叶乙酸乙酯部位的指纹图谱,通过相似度评价系统确定了18个共有峰,共指认出了2个色谱峰,分别为原儿茶酸和咖啡酸。不同产地龙利叶乙酸乙酯部位指纹图谱之间相似度较高,均大于0.9,说明10批不同产地龙利叶药材质量一致性较高,其聚类分析和主成分分析结果一致,均将10批产地分为四类。5.二甲苯致小鼠耳肿胀实验结果显示,10个产地的抑制率较为接近均在43%~52%之间,其中广州肇庆的抑制率最低为42.86%,南宁武鸣的抑制率最高为51.02%,且10个产地的肿胀度与模型组相比均有显著差异。6.采用灰色关联度分析法和偏最小二乘回归分析法建立了龙利叶乙酸乙酯部位的抗炎谱效关系,通过灰色关联度分析结果表明龙利叶乙酸乙酯部位提取物的抗炎作用是多个成分协同作用的结果。依据关联度的大小,确定各成分对抗炎作用贡献的大小顺序为8号峰>13号峰>14号峰>7号峰>2号峰>15号峰>18号峰>9号峰>10号峰>1号峰>6号峰>12号峰>4号峰>17号峰=11号峰>3号峰>5号峰>16号峰。其特征峰关联度均大于0.7。偏最小二乘回归分析结果显示,龙利叶乙酸乙酯部位提取物特征峰中3、4、12、17号共有峰与其炎症抑制率呈正相关,且相关系数大于0.1;2、5、16号共有峰相关系数绝对值大于0.1,且与炎症抑制率作用呈负相关。VIP图结果显示,5,16,4,3,2和12号特征峰的VIP值大于1。结合两种分析方法,以灰色关联度大于0.7,VIP值大于1为筛选条件,初步确定5,16,4,3,2和12号特征峰对药效的发挥有重要影响,其中5号峰为原儿茶酸,其余色谱峰待进一步鉴定。说明龙利叶乙酸乙酯部位HPLC指纹图谱中这几个色谱峰所对应的成分对药效的发挥有着重要影响。7.采用UPLC-Q Exactive高分辨液质联用技术对来源广西北海福城镇产地的龙利叶乙酸乙酯部位进行了化学成分分析,通过文献参考及谱库匹对初步推测出12个化学成分,分别为(1)油酸酰胺(2)甜菜碱(3)胆碱(4)葫芦巴碱(5)杜鹃花酸(6)奎尼酸(7)对羟基苯甲酸(8)原儿茶酸(9)阿魏酸(10)枸橼酸(11)尿苷(12)对羟基肉桂酸。结论:建立了龙利叶乙酸乙酯部位鉴别和检查方法。采用高效液相色谱法,建立10批不同产地龙利叶乙酸乙酯部位中2种成分含量测定,该方法准确、稳定,重复性好,可用于不同产地龙利叶的质量控制;建立龙利叶乙酸乙酯部位的指纹图谱,该实验方法简便、准确可靠、重复性较好,所建立的指纹图谱能够较为全面的反映龙利叶乙酸乙酯部位的化学成分分布,能够使龙利叶乙酸乙酯部位化学指纹信息最大化,最大限度地表征龙利叶乙酸乙酯部位指纹图谱特征,为龙利叶的整体质量评价提供参考;对10个产地进行了抗炎药效实验,其抑制率在42.86%~51.02%,各给药组之间无显著性差异,但与模型组之间均有显著差异,说明10个不同产地龙利叶乙酸乙酯部位提取物对炎症均有一定的抑制作用。通过灰色关联度分析和偏最小二乘回归分析对谱效关系进行结合分析,初步确定峰5,16,4,3,2和12为龙利叶乙酸乙酯提取物中对抗炎作用发挥着重要影响的成分,其中除5号峰已知外,其余色谱峰均未知。UPLC-Q Exactive高分辨质谱联用技术能够快速的推测龙利叶乙酸乙酯部位中可能含有的化学成分,可为龙利叶乙酸乙酯部位化学成分及其药效物质基础的研究提供实验依据。