【摘 要】
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禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)是小麦主要病害赤霉病发病过程中重要的致病菌。禾谷镰刀菌侵染小麦的过程中会分泌多种细胞壁降解酶降解小麦细胞壁以利于其侵染,木聚糖酶
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禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)是小麦主要病害赤霉病发病过程中重要的致病菌。禾谷镰刀菌侵染小麦的过程中会分泌多种细胞壁降解酶降解小麦细胞壁以利于其侵染,木聚糖酶是其中重要的一种。木聚糖酶是禾谷镰刀菌的重要的一类毒性因子,在其干扰宿主小麦的抗病反应中起作用。小麦通过识别禾谷镰刀菌的PAMP产生固有免疫反应,阻止病原菌的侵染和扩散,并通过R基因激活系统性免疫防御,对抗病原物入侵。小麦还会产生很多细胞壁降解酶抑制因子,妨碍禾谷镰刀菌的细胞壁降解酶的作用,进而激活抗病反应。因而寻找小麦中与禾谷镰刀菌木聚糖酶相互作用的蛋白,找到相互作用的位点,研究其在病菌侵染前后表达量的变化,在研究小麦抗赤霉病机制中具有重要的意义。本研究主要结果如下:(1)本实验构建木聚糖酶基因FG11304的诱饵载体,通过酵母双杂交的方法,筛选抗赤霉病小麦品种苏麦3号和望水白的酵母表达文库,筛选得到小麦中几丁质酶片段,与FG11304存在相互作用。(2)克隆到960bp的全长几丁质酶基因,构建酵母共转化载体,通过酵母共转化的方法验证了全长几丁质酶与FG11304存在真实的相互作用。同时将几丁质酶基因与FG11304分别构建到双分子荧光互作(BIFC)的N端载体和C端载体上,共转化拟南芥原生质体验证几丁质酶基因与FG11304之间存在互作。(3)通过生物信息学分析几丁质酶基因的功能域,并构建几丁质酶基因的一系列缺失载体,找到几丁质酶中的第83-210个氨基酸区段是其与FG11304相互作用必需的功能区段。(4)通过半定量实验,证明在禾谷镰刀菌F15诱导的下,小麦中几丁质酶的表达量明显增加,并且叶片中几丁质酶的表达量比穗子中的表达量高,推测几丁质酶在小麦抗赤霉病中起到作用。
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