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艰难梭菌(Clostridium difficile,CD),作为人肠道常驻菌,是引起抗生素相关性腹泻的主要病原菌,也是院内腹泻的主要致病菌。CDI诊断一般采用两步法,首先针对产毒株和非产毒株均有稳定表达的膜蛋白—谷氨酸脱氢酶(GDH)采用ELISA进行初筛,阳性病例再进行细胞毒素中和试验进行毒素检测。国内目前尚无针对CDI的系统的流行病调查报告,也没有批准的商品化检测试剂盒。本实验拟建立针对GDH的胶体金免疫层析检测方法,为CDI的临床检测、流行病调查,提供一种新的、高特异性检测方法。实验以CD630菌株的全基因组序列为模板,PCR方法克隆GDH完整序列,构建pET30a(GDH)表达质粒,转化至E coli BL21表达菌株,原核表达谷氨酸脱氢酶(GDH),并对表达条件进行优化。成功表达后,采用Ni-NTA亲和层析法进行纯化,并以纯化后蛋白为抗原,免疫家兔制备多克隆抗体。随后,以纯化的GDH—多克隆抗体为免疫金抗体,GDH—单克隆抗体为检测线包被抗体,建立艰难梭菌—GDH胶体金免疫层析检测方法。通过原核表达系统,高效表达GDH蛋白,经过SDS-PAGE分析,表达的GDH大小约51kDa。通过Ni-NTA系统纯化后,GDH纯度可达90%以上。纯化蛋白免疫家兔后,分离血清并通过Protein A纯化蛋白,得到效价1:51,200的多克隆抗体。以制备的多抗为免疫金抗体成功构建胶体金免疫层析检测方法,经检测其特异性良好,不与其他肠道常驻菌反应、敏感性达到80ng/mL,经过临床应用与PCR方法对照试验,准确率达到80.36%。综上,本实验建立的艰难梭菌-GDH胶体金免疫层析检测方法,具有良好的特异性、准确性,为CDI的临床诊断提供一种新的思路。