东亚钳蝎纤溶活性蛋白的分离纯化及其作用性质研究

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东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)是一种传统的中药材,其药性味辛、平,有毒,归肝经;具有熄风镇痉、攻毒散结、通络止疼的功效;传统验方中主要用于治疗小儿惊风、抽搐痉挛、中风、半身不遂、破伤风、风湿顽痹、疮疡、瘰疬和癫痫。   本文采用蝎身蝎尾分别作硫酸铵分段盐析,取40%-70%的组分,得到蛋白粗提液。经DEAE-32纤维素柱进行分离后得到一组蛋白质。后经纤溶平板测定后从蝎尾中得到一组具有纤溶活性的、分子量为37.7kD的蛋白质,含糖量为1.04%,含蛋白量为64.25%。并就温度、pH、时间、2价金属离子对其纤溶活性的影响作了研究,结果显示其最适温度为35℃,最适pH为5,Cu2+、Mn2+对其影响较大,抑制其溶纤活性,Mg2+对其无影响,Fe2+、Ca2+、Ba2+对其纤溶活性有促进作用,其中Fe2+促进作用最大,时间对其作用影响较小。并就其溶血溶栓活性做了研究,研究发现其有溶栓活性,且无溶血性,对于正常细胞的保护作用较好。MTT法测定东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)纤溶活性蛋白对S180细胞、H22细胞、A540细胞、MCF-7细胞以及HEPG-2细胞增殖的影响,纤溶活性蛋白按照不同浓度分别作用于细胞24h、48h和72h,结果显示其中对S180细胞、H22细胞、A540细胞、MCF-7细胞的抑制效果较好,对HEPG-2细胞抑制作用不明显,由此显示东亚钳蝎目的蛋白对于癌细胞有抑制作用,且对于癌细胞有选择性。实验采用鸡胚尿囊膜(CAM)模型观察东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)纤溶活性蛋白对鸡胚尿囊膜血管生成的影响。结果显示东亚钳蝎(Buthusmartensii Karsch)目的蛋白对鸡胚尿囊膜血管的生成有明显的抑制作用,因此可以作为新的抑制血管生成的药物来进行进一步的研究。
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