艾灸肺俞对LPS致炎大鼠肺等不同脏器免疫物质的影响规律

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目的:观察艾灸肺俞穴后大鼠腹腔注射LPS,机体免疫物质在肺及各相关脏腑之间的分布规律,从“一穴多脏”相关的角度探讨穴脏相关的内涵。并通过观察艾灸肺俞对HPA轴的影响及HPA轴指标与免疫指标的相关性,探讨HPA轴与免疫功能的相关性。方法:将32只SD大鼠随机分为四组,分别为空白组、LPS组(即模型组)、肺俞LPS组、肝俞LPS组,每组8只。大鼠腹腔注射2mg/kg的LPS溶液,以制备大鼠急性炎症反应模型。肺俞LPS组及肝俞LPS组分别在肺俞、肝俞处剪毛,双侧腧穴艾炷灸,大鼠扭动时换炷,每穴5壮,每日1次,连续10天。空白组及LPS组在前10天均在肺俞处剪毛,同肺俞LPS组一样抓取,不予艾灸。第十一天,空白组直接取材,其余三组予腹腔注射LPS 2mg/kg,6h后取材。用放射免疫法及酶联免疫法测定所需组织匀浆上清液及血清TNF-a、IL-2、TGF-β、sICAM-1及HPA轴指标的含量,并计算各脏器组织的脏器指数。结果:1.腹腔注射LPS对脾脏、胸腺的影响空白组各脏器间TNF-a含量比较,脾脏、胸腺TNF-a含量最高排序居第1、2位,且与居末位之血清含量相比有显著性差异(P<0.05);LPS组中脾、胸腺TNF-a含量位居后两位,且与局首位之肾脏TNF-a含量相比,有极显著性差异(P<0.01)。LPS组脾、胸腺TNF-a含量均较空白组降低,有显著性差异(P<0.05)。LPS组脾脏指数较空白组上升,有显著性统计学意义(P<0.05);肺俞LPS组、肝俞LPS组脾脏指数较空白组上升,有极显著性统计学意义(P<0.01);肝俞LPS组胸腺指数较LPS组上升,有显著性统计学意义(P<0.05)。2.艾灸肺俞穴对肺脏中免疫物质的影响LPS组肺脏TNF—a含量较空白组有下降趋势,肺俞LPS组肺脏TNF—a含量较空白组下降,有显著性差异(P<0.05),较LPS组有下降趋势;与LPS组比较,肺俞LPS组肺脏TNF—a含量排序后移至本组最后一位,且与排序居第四位之肾脏TNF—a含量相比,有极显著性差异(P<0.01)。LPS组肺脏IL-2含量较空白组有下降趋势,肺俞LPS组肺脏IL-2含量较空白组降低,有显著性差异(P<0.05),较LPS组有下降趋势;与LPS组比较,肺俞LPS组肺脏IL-2含量排序后移一位,肺俞LPS组各脏器IL-2含量差异均不显著,无统计学意义。LPS组肺脏TGF-β含量较空白组有下降趋势,肺俞LPS组肺脏TGF-β含量较空白组、LPS组均有上升趋势;与LPS组比较,肺俞LPS组肺脏TGF-β含量排序仅后移一位,且与排首位的肝脏TGF-β含量差异不显著,无统计学意义。LPS组肺脏sICAM-1含量较空白组有下降趋势,肺俞LPS组肺脏sICAM-1含量较空白组、LPS组有上升趋势;与LPS组比较,肺俞LPS组肺脏sICAM-1含量前移一位。3.艾灸肺俞穴对肺脏及相关脏腑免疫物质的影响与LPS组比较,肺俞LPS组肾脏TNF-α含量排序后移,心脏TNF-α含量增加居首位。肺俞LPS组肾脏TNF-α含量较空白组、LPS组肾脏含量均有下降趋势。与LPS组比较,肺俞LPS组中与肺相克的心、肝TNF-a含量增多,排序靠前;与肺相生的肾、脾TNF-a含量减少,排序靠后。与LPS组比较,肺俞LPS组胸腺、肝、血清、心脏中TNF-a的含量升高,肺、肠、脾、肾脏中TNF-a的含量降低,但均无统计学意义。与LPS组比较,肺俞LPS组中与肺相克的心、肝IL-2含量较多,排序仍居第1、2位;与肺相生的肾、脾IL-2含量较少,排序后移,但各脏器间IL-2含量差异无统计学意义。与LPS组比较,肺俞LPS组肝、肺、心、肠、脾脏的IL-2含量均下降,肾、胸腺、血清的IL-2含量均上升,其中血清中IL-2含量显著上升(P<0.05),其它均无统计学意义。与LPS组比较,肺俞LPS组肝脏TGF-β含量增加,排序前移居首位,且与血清、心脏TGF-β含量相比,分别有显著(P<0.05)、极显著(P<0.01)性差异。与LPS组比较,肺俞LPS组各脏器组织TGF-β含量均有上升趋势。与LPS组比较,肺俞LPS组肝脏sICAM-1含量增加,居首位,且与血清sICAM-1含量相比,有显著性差异(P<0.05);与LPS组比较,肺俞LPS组肾脏、心脏、血清中sICAM-1含量下降,肠、脾、肝、肺脏中sICAM-1含量上升,其中肺俞LPS组脾脏中sICAM-1含量与LPS组比较,有显著性差异(P<0.05)。4.艾灸肝俞穴对肝脏中免疫物质的影响LPS组肝脏TNF-a含量较空白组有上升趋势,肝俞LPS组肝脏TNF—a含量较LPS组有下降趋势,较空白组有上升趋势;与LPS组比较,肝俞LPS组肝脏TNF-a含量排序退后两位。LPS组肝脏IL-2含量较空白组有上升趋势,肝俞LPS组肝脏IL-2含量较空白组、LPS组均有上升趋势;与LPS组比较,肝俞LPS组肝脏IL-2含量排序未变。LPS组肝脏TGF-β含量较空白组有下降趋势,肝俞LPS组肝脏TGF-β含量较空白组、LPS组、均有下降趋势;与LPS组比较,肝俞LPS组肝脏TGF-β含量排序后移一位,与同组各脏器含量相比,无显著性差异。LPS组肝脏sICAM-1含量较空白组有上升趋势,肝俞LPS组肝脏sICAM-1含量较空白组、LPS组均有下降趋势;与LPS组比较,肝俞LPS组肝脏sICAM-1含量排序后移一位。5.艾灸肝俞穴对肝脏及相关脏腑免疫物质的影响与LPS组比较,肝俞LPS组中,肝脏TNF-a含量减少排序后移,心脏TNF-a含量增加排序前移,肺、肠中TNF-a含量含量后移,且与居首位之肾脏TNF-a含量相比,有显著性差异(P<0.05)。与LPS组比较,肝俞LPS组肺、肠、脾、肝、肾脏的TNF-a含量降低,胸腺、血清、心脏中TNF-a含量升高,但均无统计学意义。与LPS组比较,肝俞LPS组中,肝脏IL-2含量排序不变居首位,肺脏含量排序后移1位。与LPS组比较,肝俞LPS组肝、肠、脾、肾、胸腺、血清的IL-2含量上升,肺、心脏的IL-2含量下降,但均无统计学意义。与LPS组比较,肝俞LPS组肺脏TGF-β含量增加,仍居首位,且与肾脏、心脏、血清TGF-β含量相比分别有显著(P<0.05)、显著(P<0.05)、极显著(P<0.01)性差异,肝俞LPS组肝脏TGF-β含量减少,排序后移1位。与LPS组比较,肝俞LPS组肝脏、血清中TGF-β含量下降,肺、脾、肾、心脏中TGF-β含量上升,但均无统计学意义。与LPS组比较,肝俞LPS组肺脏sICAM-1含量增加,排序前移居第2位,且与肝、血清sICAM-1含量相比,有显著性差异(P<0.05)。与LPS组比较,肝俞LPS组肝、肾、心、血清中sICAM-1含量下降,肠、脾、肺脏中sICAM-1含量上升,但均无统计学意义。6.艾灸及腹腔注射LPS对大鼠HPA轴的影响与空白组比较,LPS组下丘脑CRH、垂体ACTH、血清ACTH、肾上腺COR含量均下降,其中下丘脑CRH下降,有极显著性差异(P<0.01),血清COR含量有上升趋势。与空白组比较,肺俞LPS组下丘脑CRH、垂体ACTH、血清ACTH均下降,其中下丘脑CRH下降,有显著性差异(P<0.05),肾上腺COR、血清COR含量均有上升趋势。与LPS组比较,肺俞LPS组下丘脑CRH、肾上腺COR含量均上升,其中下丘脑CRH上升,有极显著性统计学意义(P<0.01),垂体ACTH、血清ACTH、血清COR含量均有下降趋势。与空白组比较,肝俞LPS组下丘脑CRH、垂体ACTH、肾上腺COR、血清COR含量均有上升趋势,血清ACTH含量有下降趋势。与LPS组比较,肝俞LPS组HPA轴各指标均上升,其中下丘脑CRH、垂体ACTH含量上升,有显著性差异(P<0.05)。7.HPA轴与大鼠免疫功能的相关性实验一中LPS组各脏器组织免疫指标与实验二中肾上腺COR、血清COR无相关性。肺俞LPS组肾上腺COR分别与实验一中肺脏TNF—a、肾脏IL-2、血清IL-2含量正相关(r分别为0.862,0.776,0.823,P值分别<0.01,<0.05,<0.05);肝俞LPS组血清COR含量分别与肠TNF—a、心脏sICAM-1、脾脏sICAM-1含量正相关(r分别为0.893,0.943,0.716,P值分别<0.01,<0.01,<0.05);肝俞LPS组肾上腺COR分别与血清COR、肠TNF—a、心脏TGF-β、心脏sICAM-1、脾脏sICAM-1含量正相关(r分别为0.856,0.927,0.875,0.923,0.871,P值均<0.01)。结论:1.穴脏相关成立,肺俞与肺脏,肝俞与肝脏特异性相关。表现为艾灸肺俞穴可降低肺脏TNF-a含量,有降低肺脏IL-2、升高TGF-β、sICAM-1含量的趋势,起到减轻肺脏炎症损伤的作用。艾灸肝俞有下调肝脏TNF-a、TCF-β、sICAM-1含量的趋势,有减轻肝脏炎症损伤的作用。2.艾灸肺俞对TNF-α在LPS致炎大鼠肺等相关脏器和艾灸肝俞对sICAM-1在LPS致炎大鼠肝等相关脏器的调配规律都符合五行生克规律。艾灸肺俞穴可升高与LPS致炎大鼠肺脏呈五行相克关系的脏腑肝、心脏中TNF-a的含量,降低肺脏、肠及与肺脏呈五行相生关系的脏腑脾、肾脏中TNF-a的含量。艾灸肝俞穴可升高与肝脏五行属性呈相克关系的脾、肺及与肺相表里之肠的sICAM-1含量,降低与肝五行属性呈相生关系的肾、心及与肝俞相关的肝脏的sICAM-1含量。此结果提示穴脏相关非线性的影响关系,即非一穴对一脏的关系,而存在一穴多脏相关。穴脏相关的内涵可能为艾灸通过对穴位的刺激,促使腧穴相关脏腑之间免疫物质的调配,其规律与脏腑五行属性的生克关系相关。3.艾灸肺俞对IL-2、TGF-β、sICAM-1在各脏器间的调配及艾灸肝俞对TNF-a、IL-2、TGF-β在各脏器间的调配未呈现五行生克规律,考虑五行关系只是脏腑关系多种表现形式中的一种,各指标在脏器的分布规律还存在其它的表现形式,如功能上的相关等。也与各免疫指标在不同脏器的分泌峰值时点不同、实验材料、取材过程等因素有关。4..腹腔注射LPS可引起大鼠HPA轴受抑制的现象,艾灸肺俞、艾灸肝俞均可减轻LPS致炎大鼠HPA轴受抑制的现象。艾灸与腹腔注射LPS共为刺激原,大鼠对其产生应激反应,致炎大鼠HPA轴有兴奋的趋势。肺俞LPS组、肝俞LPS组大鼠HPA轴与其自身的免疫反应呈正相关,考虑与应激强度、持续时间有关,也提示艾灸对大鼠造成的应激可为良性应激,有提高机体免疫功能的作用,有待深入研究。
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