卵母细胞的成熟依赖颗粒细胞（GC）的调控,同时,卵母细胞体外成熟（IVM）过程中细胞核和细胞质不同步成熟导致卵母细胞细胞质成熟不完全是IVM卵母细胞发育能力低的重要原因。Roscovitine阻止细胞周期,是一种卵母细胞减数分裂抑制剂,能促进卵母细胞核质同步成熟,从而提高成熟卵母细胞的质量。因此,本研究拟探究体外培养液中添加Roscovitine预处理对牦牛GC功能和卵母细胞体外成熟的影响及其作用机制。1.Roscovitine预处理对牦牛GC体外培养的影响研究在牦牛GC培养液中添加不同浓度Roscovitine（0、6.25、12.5、25、50和100μM）预处理不同时间（3、6和9 h）后转入不含Roscovitine的培养液中培养至24 h,检测GC增殖、细胞周期、孕酮分泌以及与细胞增殖、凋亡、激素合成相关基因的表达。结果表明:（1）12.5μM+6 h的组合细胞增殖水平要显著高于6 h中其它浓度（P＜0.05）,所以在此后的试验中处理组都以6 h+12.5μM预处理;（2）处理组在24 h和48 h细胞增殖极显著高于对照组（P＜0.01）。（3）处理组在24 h时孕酮浓度显著低于对照组（P＜0.05）,但在48 h时,处理组与对照组之间差异不显著。（4）在预处理结束时,处理组G0/G1时期的细胞比例显著高于对照组（P＜0.05）;去除Roscovitine再培养24 h后,处理组G0/G1时期的细胞显著小于对照组（P＜0.05）。（5）q PCR结果显示,预处理结束时处理组与对照组BCL-2/BAX比值差异不显著（P＞0.05）,但再培养24 h,处理组BCL-2/BAX比值显著高于对照组（P＜0.05）;（6）预处理结束时,处理组HSD3B1、STAR、CDK5和PCNA表达量极显著低于对照组（P＜0.01）,但再培养24 h,处理组HSD3B1、STAR、CDK5和PCNA表达量极显著高于对照组（P＜0.01）。预处理结束时,处理组P53相对表达量极显著高于对照组（P＜0.01）,但在24 h时,两组差异不显著（P＞0.05）。2.Roscovitine预处理对牦牛卵母细胞IVM的影响研究将牦牛卵丘-卵母细胞复合体（COCs）在含不同浓度Roscovitine（0、6.25、12.5、25和50μM）IVM液中预处理6 h后转入无Roscovitine的IVM液中培养18 h,然后检测卵丘颗粒细胞扩展指数（CEI）及卵母细胞ROS含量、线粒体分布、微丝蛋白跨区投影（TZPs）、细胞凋亡和发育相关基因的表达量。结果表明:12.5μM Roscovitine浓度时卵丘扩展指数最大,所以后续试验以12.5μM作为处理组。处理组卵母细胞中ROS含量显著降低（P＜0.05）,线粒体均匀分布的卵母细胞百分比显著提高（P＜0.05）,TZPs荧光强度显著提高（P＜0.05）。处理组卵母细胞中SOD2、BCL-2/BAX、GDF9、EGFR和ZAR1的表达量极显著高于对照组（P＜0.01）。综上,用12.5μM Roscovitine预处理6 h再进行常规培养不会对GC造成不良影响。用12.5μM Roscovitine预处理COCs 6 h再进行常规IVM,可提高牦牛成熟卵母细胞的质量。