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关于昆虫抗微生物肽(Insect antimicrobial peptide)同系物(Isoforms)基因之间的免疫诱导表达差异和抗性功能差异的问题，目前国内外的研究则少有涉及。本课题组杨婉莹等在2005年完成了对黑腹果蝇抗真菌肽Drosmycin的7条同系物基因抗菌功能鉴定(Yang et al.,2006)，韩冬在2006年对家蚕抗菌肽Gloverins的6条同系物基因和家蚕抗菌肽Enbocins的2条同系物基因的诱导表达差异进行了半定量RT-PCR检测和对3种受试菌的抗性鉴定。除此外，目前还未见国内外对同一种昆虫体内抗微生物肽同系物基因之间通过实验进行抗性功能差异和免疫诱导表达差异的研究报道。
本论文研究的目的是：根据对家蚕Moricins 12条同系物基因序列的同源性和相似性，选择差异较大的3条同系物基因，采用实时定量RT-PCR(Real-TimeQuantitative RT-PCR)，的方法对其进行免疫诱导表达差异的检测和克隆表达，为今后鉴定家蚕Moricins 12条同系物基因的抗菌功能和免疫诱导机制进行初步的预备研究。
为此，参照Cheng等(2006)对家蚕12条Moricins同系物基因的命名(Chenget al.，2006)，根据它们之间的同源性和相似性分析结果，在BmmorA1-A4基因亚族中选择BmmorA1和BmmorA2(相似性为41％)，在BmmorB1-B8亚基因家族中(相似性超过90％)选择BmmorB2为代表进行克隆表达和诱导表达的定量RT-PCR检测。主要结果如下：
(1) 用巴斯德毕赤酵母、大肠杆菌K<,12>D<,31>和金黄色葡萄球菌作为诱导源，免疫注射化蛹第2天的家蚕蛹，实时定量PCR检测结果显示了家蚕BmmorA1、BmmorA2和BmmorB2同系物基因均有较弱的基础转录活性，免疫诱导后可显著加强其转录表达活性。它们的诱导表达活性差异依次为： BmmorA1>BmmorA2>BmmorB2，其中BmmorB2的表达量相对最低。
(2)家蚕BmmorA1、BmmorA2和BmmorB2同系物基因经3种诱导源免疫诱导后的转录活性高峰时期也有明显差异，经诱导后达到转录高峰的时间分别是：BmmorA1(6～12h)、BmmorA2(8～48 h)、．BmmorB2(8h)。
(3) 大肠杆菌K<,12>D<,31>、金黄色葡萄球菌和巴斯德毕赤酵母对家蚕．BmmorA1、BmmorA2和BmmorB2同系物基因的诱导表达有明显差异：细菌诱导源大肠杆菌的诱导表达高峰在诱导后8 h前后，金黄色葡萄球菌诱导BmmorA1、BmmorA2和BmmorB2的表达高峰在诱导后的6h、48h和8h，而真菌诱导源毕赤酵母的诱导表达高峰则在诱导后12 h、48 h和8 h。
(4) 分别采用分段互补PCR合成与PCR扩增的方法，获得家蚕BmmorA1、BmmorA2、BmmorB2基因序列，将其与硫氧还蛋白(Trx)和组氨酸标签(His)融合构建成重组表达载体pET-32a-BmA1、pET-32a-BmA2、pET-32a-BmB2，在Rosetta(DE3)宿主菌中得到成功表达。
(5)SDS-PAGE电泳检测结果显示融合蛋白主要以可溶性形式存在，对表达培养液上清进行Ni-NTA亲和层析纯化和脱盐处理，洗脱收集的Trx-BmA1、Trx-BmA2、Trx-BmB2融合蛋白对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)具有抗菌活性，但对大肠杆菌K<,12>D<,31>均没有明显抑菌作用。