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我国大多数绵羊的繁殖力较低,制约整个绵羊产业的发展,是提高绵羊出栏率的一个主要瓶颈,因此只有提高绵羊的繁殖力才能从根本上提高绵羊的生产效率。研究表明绵羊繁殖性状属于低遗传力性状,利用常规的育种技术来提高绵羊的繁殖力,难度较大;而利用现代分子生物学技术,从基因水平对绵羊的繁殖性状进行改良,以达到提高绵羊繁殖力的效果,能够极大的缩短育种时间,在较短的时间内就能达到提高绵羊繁殖力的目的。
一、绵羊繁殖相关基因的多态性分析和相关性分析
本研究以新疆地区中国美利奴单羔羊、双羔羊,哈萨克和湖羊四个群体为研究对象,运用PCR-RFLP或PCR-SSCP方法,选择与绵羊繁殖性状相关的几个功能基因(视黄素受体、抑制素、褪黑激素受体和催乳素受体基因等)进行多态性分析研究,并将基因多态性与绵羊繁殖性状进行关联分析,以期为绵羊分子标记辅助选择提供有效的标记,为后期选育高繁殖性能的新品系打下坚实的基础。
1) 采用PCR-SSCP对PER和HIOMT基因进行多态性检测,结果表明两个基因的扩增片段在三个群体中均没有SSCP多态性。
2) 采用PCR-SSCP对INHBA基因外显子1扩增片段进行了多态性检测,结果显示该扩增片段存在SSCP多态,测序结果表明,AB基因型第124bp处有A→G的突变、149bp处有A→G的突变,BB型124bp处有A→G的突变。经关联性分析表明,三种基因型对中国美利奴羊初生重和产羔数的影响均不显著(P>0.05)。
3) 采用PCR-SSCP对PRLR基因外显子10扩增片段进行多态性检测,在PRLR基因外显子10的扩增片段多态性检测过程中,引物PRLR2和PRLR3扩增片段检测到突变位点,测序结果表明,PRLR2扩增片段的AA型第53bp处发生A→G的突变,AB型在53bp处出现A→G突变、81bp处出现G→A突变; PRLR3 扩增片段的DE型146处发生C→G的突变,CD型132bp处发生G→A的突变, CE型132bp处发生了G→A的突变, 167bp处发生C→T的突变。通过关联性分析表明PRLR2位点的AA基因型与BB型对初生重的影响差异显著(P<0.05);三种基因型之间产羔数均值差异都不显著(P>0.05);PRLR3位点的四种基因型之间初生重均值差异都不显著(P>0.05),CE和DD基因与CD和DE基因型之间产羔数均值差异显著(P<0.05)。
4) 采用PCR-SSCP对RXRG基因进行多态性检测,在RXRG基因外显子2的扩增片段上检测到突变位点,测序结果表明,P2扩增片段AA型131bp处有A→G的突变,BB型32bp处有G→A的突变。通过关联性分析表明,AA基因型中国美利奴羊产羔数比AB基因型多0.22只(P<0.05),BB基因型中国美利奴羊产羔数比AB基因型多0.15只(P<0.05),即AA和BB基因型比AB基因型更易产生双胎,但AA基因型个体较少,统计意义不大;AB基因型平均初生重最大,AB基因型与AA和BB基因型之间差异均显著(P<0.05)。
5) 采用PCR-RFLP方法对MTNR1A基因进行多态性分析,结果表明MTNR1A基因外显子2在604位碱基处表现出Rsa Ⅰ酶切多态性。经关联性分析χ2独立性检验结果表明,中国美利奴双胎羊群体与单胎羊群体中该酶切多态位点的基因型分布差异显著(P<0.05);单胎羊群体与湖羊群体中多态位点的基因型组成差异显著(P<0.05);双胎羊群体与湖羊群体中多态位点的基因型组成差异不显著(P>0.05)。
二、有利基因型的验证和种公羊育种值的估计
利用卡方独立性检验对PRLR、RXRG和MTNR1A三个有利基因的基因型频率在试验群与大群中分布进行了相似性分析,检验结果表明三个基因基因型分布在大群和试验群上没有差别,由此可知三个有利基因对绵羊部分繁殖性状可能有影响力。通过PRLR和RXRG两个基因位点的平均效应对种公羊的估计育种值进行综合评定,结果显示8050号种公羊的个体育种值最高,8003号的种公羊个体育种值最低。并根据有利基因MTNR1A的基因型选择出较为理想的的种公羊耳号分别为8050,8044,8252和8285。如果将四只育种值较高的种公羊运用于绵羊繁殖力的改良,能大大的缩短改良年限,为选育高繁殖绵羊新品系打下坚实的基础。