碱性磷酸酶广泛存在于动物、植物与微生物中,在生物体内,它不仅直接参与磷的代谢活动,维持体内适宜的钙磷比例,而且还与角蛋白等蛋白质的分泌,DNA、RNA、脂质等代谢有关,它对钙质吸取、骨骼形成、磷酸钙沉积都起着重要作用。因此它是生物体内的一个重要调控酶,对生物体的正常生理代谢影响巨大。同时,它也是基因工程,临床诊断的一个重要工具酶,应用前景巨大。 黄鳝[Monopterus albus(Zuiew)]属鱼纲、辐鳍亚纲、合鳃目、合鳃科、黄鳝亚科,是我国重要的淡水经济鱼类,广泛分布于全国各地。通过比较研究,我们发现黄鳝内脏中ALP活性非常高,经过酶活力普查对比和同工酶分析,我们了解到该酶在黄鳝内脏各组织中的分布和同工酶数量,并从价格便宜的黄鳝肝脏中分离纯化得到高比活的ALP,对其理化特性、必需功能基团进行研究,探讨碱性磷酸酶对黄鳝的代谢影响。并且在此基础上摸索该酶在分子克隆和酶标诊断试剂中的应用,为黄鳝碱性磷酸酶的应用开辟一个途径。 本文主要对黄鳝内脏各组织ALP分布、同工酶进行研究,并对肝脏碱性磷酸酶进行分离纯化、部分性质研究,现将结果总结如下: 1.黄鳝七种内脏组织碱性磷酸酶比较酶学研究。 通过对黄鳝心脏、肝脏、脾脏、肠、肾脏、胆囊和血清七种组织中碱性磷酸酶酶活力的普查,发现肝中该酶总活力最高,胆中该酶比活力最高;通过对这些组织该酶同工酶电泳分析发现,该酶具有组织特异性,各组织中该酶具有不同同工酶,且肠中存在两种同工酶。 2.黄鳝肝脏碱性磷酸酶的分离纯化 以黄鳝肝脏为提取酶材料,经Tris-HCl缓冲液(pH 8.6)抽提、正丁醇处理、硫酸铵分级沉淀获得粗酶制剂,进一步经过DEAE-琼脂糖离子交换柱层析,Sephacryl S-200凝胶过滤纯化,