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草鱼呼肠孤病毒(GrassCarpReovirus,GCRV)是我国分离鉴定的第一株鱼类病毒,隶属呼肠孤病毒科水生呼肠孤病毒属。GCRV也是该属中致病性最强的一种病毒,是引起我国大面积草鱼幼鱼出血病爆发的主要病原体,死亡率高达80%,给我国水产养殖业带来了极大的经济损失。目前,其吸附与侵染细胞的机理尚未得到揭示。
对病毒的结构研究表明,其为20面体球形颗粒,含有双层蛋白衣壳。其内部的基因组由11条(S1-S11)分段的双链RNA组成,编码12种蛋白质,包括7种结构蛋白(VP1-VP7)和5种非结构蛋白(NS1-NS5)。其中,结构蛋白VP5和VP7以200个异源六聚体的形式构成了病毒的外层衣壳蛋白。针对VP5和VP7制备的多抗血清已被发现具有中和GCRV的效应,揭示出VP5和VP7在侵染宿主细胞过程中发挥重要作用。但是多抗血清中所含的是多克隆抗体,其对VP5和VP7的识别位点是混杂的,无法特异性地研究病毒对细胞的吸附与侵染过程。
在本研究中,分别利用原核表达的VP7、VP5、VP5的N端和C端片段对本实验室己构建的大容量鼠源天然噬菌体展示单链抗体文库进行淘选,最后得到了7个不同的单链抗体。其中识别VP7、VP5N端片段和VP5C端片段的单链抗体各有两个,识别全长VP5的单链抗体有一个。进一步Westernblot验证,发现所得到的单链抗体识别的均为线性表位。针对原核表达VP7淘选得到单链抗体19B7能够成功识别真核细胞中培养增殖的天然GCRV,包括变性与非变性形式的。进一步的中和实验鉴定,发现单链抗体19B7对GCRV也具有中和效应,这一结果再次证明了VP7在病毒侵染细胞中起着至关重要的作用。而且,作为单克隆中和抗体,它将成为研究病毒与宿主细胞相互作用的有力工具。下一步的研究重点将是确认抗体对VP7的识别位点,这也将为探讨病毒对细胞的吸附与侵染提供新的思路。
总结来说,本研究获得了特异识别并中和GCRV的单链抗体,其将会在今后的病毒细胞相互作用研究中发挥重要作用。