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第一部分PKR在大鼠急性胰腺炎模型中与胰腺组织炎症及损伤相关目的:初步探讨大鼠急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）模型中双链RNA依赖性蛋白激酶（double-stranded-RNA-activated protein kinase,PKR）与胰腺炎症及损伤之间的相关性。方法:48只大鼠通过Oh、1h、2h、3h腹腔注射雨蛙素50 μg/kg/h四次,构建大鼠AP模型,AP模型组大鼠分为制模后4h、8h、12h、24h组（每组12只）;对照组大鼠（12只）仅腹腔内注射50 μg/kg生理盐水一次。分别提取AP各时间点及对照组胰腺组织,蛋白质免疫印迹方法检测PKR的表达;免疫组化方法检测对照组及AP 8 h组胰腺中PKR的表达;苏木素伊红（HE）染色检测对照组及AP 8 h组胰腺组织病理变化;酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测大鼠AP各时间点组及对照组胰腺组织中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、白介素 6（interleukin 6,IL-6）及乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）水平;spearman相关性分析检测PKR表达分别与TNF-α、IL-6、LDH水平之间的联系。结果:①AP各时间点组胰腺组织中PKR蛋白水平均高于对照组（P<0.05）。免疫组化显示AP 8 h组胰腺组织PKR表达高于对照组。②AP 8 h组大鼠胰腺组织与对照组相比,表现为出血、水肿及炎细胞浸润。③AP8h组TNF-α、IL-6和LDH水平达到最高,12 h和24 h组有所降低。AP各时间点胰腺组织TNF-α、IL-6和LDH水平与对照组相比均升高（P<0.05）。④PKR表达分别与TNF-α、IL-6、LDH水平之间具有正相关性。结论:AP大鼠炎症胰腺组织中PKR、TNF-α、IL-6、LDH水平均升高,并且PKRR表达分别与TNF-α、IL-6、LDH水平之间具有正相关性,表明PKR与AP胰腺组织的炎症及损伤相关。第二部分PKR促进胰腺细胞炎症及损伤的机制研究目的:初步探讨PKR在胰腺腺泡细胞雨蛙素刺激条件下的表达、作用及相关机制。方法:运用10 nmol/L雨蛙素刺激大鼠胰腺腺泡AR42J细胞4 h、8 h、12 h、24 h,蛋白质免疫印迹检测AR42J细胞中PKR蛋白水平,ELISA检测AR42J细胞培养基上清液中TNF-α、IL-6、LDH水平。乱序小干扰RNA（scramble siRNA,作为转染的阴性对照）、PKR siRNA转染AR42J细胞,蛋白质免疫印迹检测AR42J细胞中PKR表达,ELISA检测AR42J细胞培养基上清中TNF-α、IL-6、LDH水平。蛋白质免疫印迹检测雨蛙素刺激组及对照组AR42J细胞中κB激酶a抑制剂（inhibitor of kappa B kinase α,IKKα）、P65（NF-κB亚基之一）、磷酸化P65表达,免疫共沉淀检测AR42J细胞中PKR与IKKα之间的相互作用。细胞免疫荧光检测PKR与IKKαα在AR42J细胞中的共定位。AR42J细胞核浆分离及蛋白质免疫印迹检测P65在胞核及胞浆中的表达。AR42J细胞用抗P65抗体、抗PKR抗体及Hoechst 33342（DNA染料）进行细胞荧光染色,以观察PKR及P65的亚细胞定位。结果:雨蛙素刺激各时间点PKR、TNF-α、IL-6和LDH水平均高于对照组（P<0.05）。AR42J细胞PKR、TNF-α、IL-6和LDH在雨蛙素刺激4小时开始升高,8小时达到最高,12小时和24小时稍降低。PKR siRNA抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞TNF-α、IL-6和LDH水平,说明PKR促进雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞炎症及损伤。AR42J细胞IKKα及p-P65蛋白水平在雨蛙素刺激后升高（P<0.05）,P65蛋白水平无变化。免疫共沉淀显示PKR与IKKα相互作用,且与对照组（不经雨蛙素刺激）相比,相互作用在雨蛙素刺激8 h后增加。AR42J细胞免疫荧光双标显示对照组中PKR与IKKα主要存在于胞浆,两者主要在胞浆中共定位;雨蛙素刺激8 h后,PKR与IKKα发生核转位,主要在胞核中共定位。雨蛙素刺激8 h联合PKR siRNA转染,蛋白质免疫印迹显示与对照组相比,P65发生核转位。与雨蛙素刺激组相比,雨蛙素刺激联合PKR siRNA转染组P65核转位受到明显抑制。而PKR siRNA转染组与对照组相比,P65核转位无影响。AR42J细胞免疫荧光双标显示对照组中PKR与P65主要定位于胞浆,雨蛙素刺激8小时联合scramble siRNA转染组与对照组相比,PKR与P65发生核转位;雨蛙素刺激联合PKR siRNA转染组与雨蛙素刺激联合scramble siRNA转染组相比,PKR与P65核转位受到抑制,说明雨蛙素刺激后,PKR通过与IKKαα相互作用,促进P65的磷酸化及核转位。结论:①雨蛙素刺激上调AR42J细胞中IKKα、p-P65表达。②PKR促进雨蛙素诱导的AR42J细胞炎症及损伤。③PKR通过与IKKα相互作用,促进雨蛙素诱导的P65磷酸化及核转位。第三部分 PKR在急性胰腺炎患者外周血单核细胞中的表达变化目的:通过检测AP患者外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中PKR水平,初步探讨PKR水平变化与AP病情严重程度的相关性。方法:选取确诊为AP的109例患者,分为轻症急性胰腺炎（mlid acute pancreatitis,MAP）组 33 例、中重症急性胰腺炎（moderately severe acute pancreatitis,MSAP）组 38 例、重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）组 38例,同期选择健康人群56例,分别抽取外周血,人PKR ELISA试剂盒检测PBMC中PKR水平。结果:①AP患者与健康人群相比,PBMC中PKR水平明显增高,P<0.05。②PBMC中PKR水平随着AP严重程度逐渐增高,MSAP组及SAP组患者与MAP组患者PBMC中PKR水平相比,P<0.05;SAP组患者与MSAP组患者PBMC中PKR水平相比,P<0.05。结论:AP患者PBMC中PKR水平高于健康人群,并且PKR水平与AP患者的病情严重程度呈正相关。