目的:检测RACK1基因在T细胞中特异性敲除对小鼠γδT细胞和NKT细胞胸腺内发育、外周比例和数量的影响;并分析对感染免疫、炎症损伤的影响。方法:采用Cre-LoxP系统条件性敲除T细胞中的RACK1基因,得到RACK1在T细胞中特异缺失的小鼠(KO小鼠,同窝对照小鼠称为WT小鼠)。观察李斯特菌感染后,WT小鼠和KO小鼠死亡率及其肝脾的载菌量有何差别。使用流式细胞术检测CD3、CD4、CD8、γδTCR、Vγ1、Vγ2等,检测胞内因子IL-17的表达。构建嵌合体小鼠,将CD45.1~+CD45.2~+的WT小鼠骨髓单个核细胞与CD45.1~-CD45.2~+的KO小鼠骨髓单个核细胞以1:1的比例通过尾静脉注射,打入清髓后的CD45.1小鼠体内,分析两种来源的γδT细胞在完全相同环境下,是否仍呈现一些方面的差异。利用Con A诱导建立小鼠急性肝损伤模型,观察在WT和KO小鼠中,其死亡率、肝脏H&E染色以及血清转氨酶表达水平的高低。利用流式细胞术检测CD3、NK1.1、CD1d-tetramer等,以及检测胞内因子TNF-α、IFN-γ的表达水平,分析WT小鼠和KO小鼠在这些方面有何差异。结果:1、KO小鼠在受到李斯特菌的感染后,死亡率以及肝脾的载菌量计数与WT小鼠相比均有不同程度的下降。而KO小鼠中γδT细胞的百分比和绝对数相比于WT小鼠都大幅度升高。进一步使γδT细胞的亚群Vγ1、Vγ2以及分泌的IL-17的绝对数显著升高。2、嵌合体小鼠的数据证明,来自于KO小鼠的γδT细胞并没有显著升高。3、KO小鼠中CD3~+CD1d-tetramer~+iNKT发育障碍,Con A诱导小鼠急性肝损伤模型表明,KO小鼠的死亡率远低于WT小鼠,且H&E染色中证明了KO小鼠的肝损伤非常有限。而血清中AST和ALT的水平测定同样证明了WT小鼠的肝脏损伤更为显著。4、表面marker染色证明了KO与WT小鼠相比,Con A诱导后,肝脏中传统T细胞的百分比和绝对数量都大幅度减少,而CD3~+NK1.1~+NKT细胞和CD3~-NK1.1~+NK细胞的百分比和绝对数没有变化;胞内因子染色证明了IFN-γ在T细胞、NKT细胞以及NK细胞中的比例和绝对数也都明显下降,TNF-α却没有显著变化。5、通过纯化小鼠脾脏传统T细胞,利用Con A在体外刺激后,发现IFN-γ的表达并没有缺陷。结论:在小鼠模型中,证明了虽然KO小鼠外周传统T细胞中的CD8~+T细胞比例和绝对数大幅度减少,但是小鼠清除细菌的能力并没有由此而减弱,甚至更强。RACK1基因的敲除对外周γδT细胞的百分比和绝对值存在影响。构建嵌合体证明了在KO小鼠中,外周γδT细胞的增加是由于环境外在缺陷所导致的。而RACK1在T细胞中的特异性缺失,不仅使外周传统T细胞中的百分比和绝对数出现了大幅度的减少,而且导致CD3~+CD1d-tetramer~+iNKT细胞发育障碍。Con A诱导后,RACK1在T细胞中的特异性缺失对肝脏起到了一定的保护作用。在特异性缺失RACK1的传统T细胞中,Con A注射后IFN-γ的表达减少,可能是由于肝脏内部的微环境改变所致。在体外刺激外周传统T细胞,RACK1并不直接影响IFN-γ的表达。