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目的 (1) 对猴骨髓基质干细胞(rBMSc)进行体外培养及扩增,观察其原代及传代细胞的生长特点及生物学特点。(2) 观察恒河猴骨髓基质干细胞(rBMSc)与新型可吸收羟基磷灰石(HA)及AO人工骨β-磷酸三钙(β-TCP)的体外相容性。为在灵长类动物体内构建组织工程化骨作材料方面的准备。(3) 用血管束植入法异位构建血管化的组织工程骨,观察血管化的效果及对成骨作用的影响。(4) 用绿色荧光蛋白(GFP)标记rBMSc,观察其在组织工程骨体内构建中对种子细胞的示踪作用。(5) 对恒河猴体内构建组织工程骨进行安全性评价。 方法 (1) 从髂后上棘抽取成年恒河猴骨髓,用全骨髓培养法进行体外培养获得BMSc,胰酶消化传代,用条件培养基培养传代细胞。逐日倒置显微镜观察细胞生长情况,对传代细胞进行HE染色及碱性磷酸酶(ALP)染色。(2) 取第三代恒河猴骨髓基质细胞与材料复合培养。实验分三组:A组将rBMSc与HA复合培养,B组rBMSc与β-TCP复合培养,C组为对照,只有细胞不加材料。倒置相差显微镜、扫描电镜观察各组细胞形态及增殖情况,MTT法半定量检测细胞增殖情况。(3) 将可降解HA订制成中空的圆柱体,侧方开槽。实验分4组,① 可吸收羟基磷灰石(HA)组(M组):单将材料植于肌袋内;② HA+rBMSc组(MC):将材料接种诱导培养的rBMSc;③ HA+血管束植入组(MB):将材料内植入血管束,不加细胞;④ HA+血管束植入+rBMSc(MBC):材料接种细胞并植入血管束。需种细胞的组别,将经诱导培养的rBMSc以5×10~6/ml的密度接种于材料上。血管束植入组,将胸背动静脉分离,将其游离约4～5cm,将血管束从材料的侧槽内