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目的: 观察Calpain的相关抑制剂对不同转移能力肝癌细胞迁移浸润能力和肝癌细胞信号通路相关蛋白表达及活性的影响,进一步认识肝癌转移分子机制,为临床防治肝癌的转移复发提供依据。 方法: (1)用Western blot检测3株不同转移能力肝癌细胞(MHCC97-H、MHCC97-L、HepG2)和1株正常肝细胞(HL-7702)中Calpain-1及Calpain-2表达,筛选与肝癌转移有关的Calpain的亚家族成员;(2)用ALLM、Calpain inhibitor IV、Calpain inhibitor VI、Calpastatin四种Calpain抑制剂,分别给予高、中、低三种浓度预处理MHCC97-H肝癌细胞24h、48h及72h,用Western blot方法观察Calpain-2的表达及剪切活性,选择4种抑制剂的最适浓度和作用时间;(3)用4种抑制剂的最适浓度和作用时间处理肝癌细胞和正常肝细胞,观察4种抑制剂对肝癌细胞信号通路相关蛋白 Src、FAK、及 Dicer的表达,通过划痕实验检测对细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测对细胞侵袭能力的影响。 结果: (1)与正常肝细胞HL-7702相比,Calpain-1在4种肝细胞中表达无统计学差异(P>0.05),Calpain-2在3种肝癌细胞中表达上调(P<0.05),有转移能力的肝癌细胞中Calpain-2的表达上调(P<0.01)。(2)4种高浓度Calpain-2抑制剂(ALLM、Calpain inhibitor IV、Calpain inhibitor VI、Calpastatin)分别处理 MHCC97-H细胞72 h,都使Calpain-2的表达下调(P<0.05或P<0.01)。(3)高浓度ALLM和Calpain inhibitor VI处理3种肝癌细胞和1种正常肝细胞72h后,与正常肝细胞相比,具有转移能力肝癌细胞MHCC97-H和MHCC97-L中SRC、FAK表达上调(P<0.01),Dicer的表达下调(P<0.01);无转移能力的肝癌细胞HepG2中SRC、FAK表达增高不明显,(P>0.05),Dicer的表达下调(P<0.05)。高浓度 Calpain inhibitor IV和Calpastatin处理3种肝癌细胞和1种正常肝细胞72h后,与未加抑制剂组相比,具有转移能力肝癌细胞的SRC、FAK的表达下调(P<0.01),无转移能力的肝癌细胞HepG2中SRC、FAK表达下调不明显(P>0.05),Dicer的表达上调(P<0.01)。(4)划痕实验结果显示,高浓度ALLM和Calpain inhibitor VI处理3种肝癌细胞和1种正常肝细胞72h后,与0h相比,高转移性肝癌细胞MHCC97-H的迁移能力减弱(P<0.05);高浓度Calpain inhibitor IV和Calpastatin处理种肝癌细胞和1种正常肝细胞72h后,与0h相比,3种不同转移能力的肝癌细胞(MHCC97-H、HepG2、MHCC97-L)迁移能力都减弱(P<0.01或P<0.05)。(5)侵袭实验结果显示,高浓度ALLM和Calpain inhibitor VI处理3种肝癌细胞和1种正常肝细胞72h后,4种细胞的侵袭能力无统计学差异(P>0.05),而高浓度Calpain inhibitor IV和Calpastatin处理3种肝癌细胞和1种正常肝细胞72h后,3种肝癌细胞侵袭能力下降(P<0.01)。 结论: (1)Calpain-2在3种肝癌细胞中高表达及有转移能力肝癌细胞中表达程度更高,提示calpain-2与肝癌的发生和转移有关。(2)转移能力的肝癌细胞与Src、FAK的高表达,Dicer的低表达有关。(3)Calpain-2的抑制剂可通过抑制 Calpain-2的活性和相关基因的表达来影响肝癌细胞的迁移和转移。(4)Calpain-2的抑制剂提高 Dicer的表达,降低肝癌细胞迁移、侵袭。