以哺乳动物细胞为宿主，反应器培养进行重组蛋白药物的生产，已经成为生物制药的主要技术，目前国际上已有80%以上的重组蛋白药物通过哺乳动物细胞表达。相比细菌和酵母菌，哺乳动物细胞对各种应激环境的耐受力差，对培养环境的严格要求限制了大规模培养，提高了生产成本。在对细胞增殖、凋亡、代谢等机理认识的基础上，找到合适的靶点对细胞进行遗传改造，使其更适合工业化培养，是生物工程的重要研究内容。结合本实验室以往的研究，以及文献报道，我们推测应激响应分子—MGF有望作为提高宿主细胞应激耐受力的靶点得到利用。本研究利用MGF基因遗传重构了CHO-K1宿主细胞，并评价了重组细胞对多种应激环境的耐受能力，主要研究内容和结果如下：1. PCR扩增MGF表达序列BamHI和AscI双酶切插入含GFP标签的慢病毒pLenti6.3_MCS质粒，构建慢病毒重组质粒pL-GFP-MGF。鉴定序列正确的基础上与包装质粒一起共转化293T细胞，包装获得重组病毒LV-MGF和空病毒LV-null。高速梯度离心获得纯化病毒，滴度达到1.25×108和2×107。2. Polybrene介导病毒MOI值为5感染CHO-K1细胞，获得50%以上的感染率，在8μg/ml blasticidin选择压力下，持续培养2周，筛选获得稳定克隆。Westernblot实验证实所筛选的克隆株能高水平表达MGF，命名CHO-MGF，空病毒感染株命名为CHO-null；3.分别模拟无血清培养基、消耗过培养基和酸碱培养基进行细胞培养，从细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞活力以及葡萄糖与乳酸代谢角度评价CHO-MGF、CHO-null以及亲本细胞CHO-K1对三种应激环境的耐受力：（1）在无血清的培养环境下，MTT实验与细胞周期结果显示，CHO-MGF较CHO-null、CHO-K1细胞具有更高的增殖能力；经过48h的无血清培养，流式细胞仪与台盼蓝拒染实验分别测定三种细胞的凋亡率与细胞存活率，结果显示，MGF能够提高CHO-K1细胞的无血清耐受力；使用SBA生物传感分析仪，测定经过三种细胞消耗过培养基中葡萄糖与乳酸的浓度，间接地证明了，CHO-MGF具有比较高的增殖速度，同时，也意味着重组力生长因子能够提高CHO-K1细胞的乳酸适应力；(2)通过培养CHO-K1细胞的方式制备了模拟哺乳动物分批培养后期营养物质消耗的培养环境（Spent medium）；通过MTT实验、流式细胞仪测定细胞周期实验测定三种细胞的增殖能力，结果显示，CHO-MGF细胞较CHO-null、CHO-K1细胞在营养物质消耗的培养条件下有更高的增殖能力，另外，葡萄糖浓度测定结果也证明了重组表达MGF能提高；通过流式细胞仪分析细胞凋亡与台盼蓝拒染实验测定细胞存活率，证明重组MGF能提高宿主细胞对营养物质消耗培养环境的抗凋亡能力；乳酸浓度测定实验表明CHO-MGF细胞较CHO-null和CHO-K1细胞具有更强的乳酸耐受力；(3)通过MTT实验制备了模拟哺乳动物宿主细胞的酸碱培养环境；MTT实验和流式细胞仪测定细胞周期实验显示CHO-MGF细胞较CHO-null、CHO-K1细胞具有更高的增殖能力，葡萄糖浓度测定实验也间接地证明了重组MGF能提高哺乳动物宿主细胞的增殖速度；流式细胞仪测定细胞凋亡实验表明，过表达MGF能提高哺乳动物宿主细胞酸碱培养环境的抗凋亡能力，台盼蓝拒染实验也证明了这一结论。综上所述，本研究以慢病毒为载体，构建了稳定表达MGF的CHO-K1细胞株，与对照组细胞相比，该重组细胞能更好的适应无血清培养、spend-medium，弱酸性培养等培养环境，表现出更高的增殖能力和存活率，具有一定的抗凋亡能力。