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肿瘤对人类生命和健康造成了重大威胁，而转基因小鼠已成为研究各种肿瘤形成机制的有力工具。联合应用四环素诱导系统和Cre/LoxP系统的高效且无毒的诱导基因表达调控系统是近年来发展起来的。其应用在转基因小鼠上，实现了对外源基因时空表达的可控，使得小鼠肿瘤模型更接近实际情况,更高效地解析肿瘤的发生机制。人类肿瘤中最常见的癌基因异常是ras基因突变,其中对人类影响较大的是K-ras基因突变。为深入研究K-ras基因突变致癌的发生机制，以期达到治疗肿瘤的目的，需精确调控K-ras突变基因的时空表达，建立合适的肿瘤模型。在实验室已有的四环素诱导系统的反应元件TRE-Kras-G12D小鼠前提下，需要再构建调控元件转基因小鼠，通过这两种小鼠交配所得双阳性小鼠，诱导Kras G12D蛋白的表达。而本文的主要工作就是基于Cre/LoxP和四环素诱导系统原理，构建出可潜在高表达tTA蛋白的CL-tTA转基因小鼠，可作为实验室的转基因工具鼠，为构建不同癌基因肿瘤模型打下基础。本文主要是通过分子生物学常用技术构建pClkhl-tTA-IRES-GFP重组质粒，电转ES细胞，用潮霉素B和他莫昔芬筛选出高表达的ES细胞，进行拷贝数和细胞水平tTA功能鉴定，囊胚注射，获得嵌合体小鼠。嵌合体小鼠与FVB小鼠交配，所得子代经PCR初步鉴定，可获得CL-tTA阳性小鼠。下面进一步鉴定阳性小鼠的拷贝数，以及在细胞水平上证明tTA调控功能。然后将制备好的CL-tTA阳性小鼠与实验室中的TRE-Kras-G12D小鼠交配，获得双阳性小鼠。最后分别对一部分小鼠进行鼻腔注射Adeno-cre病毒，另一部分进行皮内注射Adeno-cre病毒，三个月后进行解剖，取组织进行HE染色观察是否形成肿瘤。实验结果表明，成功构建了单拷贝高表达的CL-tTA转基因小鼠，与TRE-Kras-G12D小鼠交配后获得双阳性小鼠，经Adeno-cre病毒鼻腔注射和皮内注射，三个月后很好地诱导了皮肤肿瘤，而肺组织也出现异常。在这里CL-tTA转基因小鼠潜在高表达tTA蛋白，双阳性小鼠在合适时间，不同部位，经Adeno-cre病毒诱导可产生多种肿瘤，为今后深入研究KrasG12D在这些肿瘤发生发展中的作用提供前提和基础。