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前言近年来,随着人们生活水平的提高,室内装修与装饰已很普遍,使室内污染成为人们关注的问题。儿童少年正处于快速生长发育期,与成人比较,室内污染对儿童少年健康的危害更加严重。儿童患呼吸系统疾病尤其是哮喘的发病率逐年升高,究其原因可能与环境污染程度加重,室内外空气中含有的粉尘,二氧化碳,甲醛,苯,氨以及香烟的烟雾等有关。然而,这些污染物造成的肺损伤机制尚不十分清楚。本研究以广泛存在于油漆及装饰材料中苯的主要代谢产物氢醌（Hydroquinone,HQ）为毒物,研究其对肺组织的毒性机制,并探讨有效的预防和干预方法。HQ是苯在体内的重要代谢产物,在自然界中广泛存在,同时也是香烟烟雾和焦油中的主要成分之一。HQ在体内代谢过程中可产生大量自由基导致支气管和肺的损伤,但目前确切机制尚不十分清楚。已知线粒体在外来化学物所致的细胞损伤,尤其是氧化损伤中为主要的靶细胞器,线粒体损伤是导致多种疾病发生的主要病理机制之一。硫辛酸（R-α-Lipoic Acid,LA）是目前备受关注的抗氧化剂,已经广泛用于糖尿病并发症的预防和治疗中。本文采用噻唑蓝（MTT）和线粒体特异性探针（5,5’,6,6’-Tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide,JC-1）的方法,检测氢醌对体外培养的中国仓鼠肺细胞（V79）的毒性作用,并重点研究HQ对线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,△Ψm）的影响,同时选择硫辛酸（R-α-Lipoic Acid,LA）作为抗氧化剂,进行干预性研究,为进一步研究HQ的病理发生机制,采取有效的预防与治疗措施提供理论依据。研究目的1、探讨不同剂量HQ对V79细胞的毒性作用。2、探讨能引起V79细胞毒性作用的HQ剂量对V79细胞线粒体膜电位的影响。3、采用LA进行干预性研究,确定LA的适宜干预剂量及可能保护机制。实验材料和方法一、实验材料中国仓鼠肺细胞（V79）,HQ,LA,DMEM高糖培养液,胎牛血清,胰蛋白酶-EDTA,JC-1,MTT。二、实验方法1、细胞的培养与分组V79细胞用细胞培养液（DMEM培养液含10%胎牛血清,100U/mL青霉素和100μg/ml链霉素）置37℃,5%CO2培养箱中,每2天换液1次。将处于对数生长期的V79细胞按105个/ml的细胞密度接种到96孔板、6孔板和培养瓶中,培养24h后换成含1%胎牛血清的培养液,并分组施加以下处理因素:①对照组:单纯培养液培养。②HQ组:HQ终浓度为10,20,30,40,50,100,150μmol/L。③LA组:LA终浓度为50,100μmol/L。④LA+HQ组1:LA终浓度为50,100μmol/L;HQ终浓度为50μmol/L。⑤LA+HQ组2:LA浓度同④组,HQ终浓度为100μmol/L。继续培养24h。2、细胞存活率的测定MTT法3、线粒体膜电位的测定流式细胞术和倒置荧光显微镜4、统计分析采用SPSS11.5统计软件中单因素方差分析处理,数据用（?）±s表示,检验标注α=0.05。实验结果一、不同浓度HQ对V79细胞存活率的影响与对照组比较,当HQ为40μmol/L时,V79细胞存活率明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;并且HQ在40～150μmol/L范围内,随着HQ浓度增高,V79细胞存活率下降,呈剂量-效应关系。二、LA对HQ所致V79细胞存活率下降的干预作用与对照组比较,LA为50和100μmol/L时,对细胞存活率没有影响,但此浓度下的LA可以明显拮抗50和100μmol/L HQ所引起的V79细胞存活率的下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。三、LA对HQ所致V79细胞线粒体膜电位影响的干预作用对照组V79细胞线粒体膜电位为1.12,当50、100μmol/L的HQ作用于V79细胞时线粒体膜电位明显降低,分别为0.22和0.03;50μmol/L的LA单独作用于V79细胞的线粒体膜电位为0.95;与单纯HQ组比较,50μmol/L的LA能明显拮抗50、100μmol/L的HQ对V79细胞线粒体膜电位造成的损伤作用,使其线粒体膜电位分别上升至0.79和0.63。结论1、对线粒体的损伤可能是HQ引起V79细胞毒性的重要途径之一。2、一定浓度的LA对HQ引起的V79细胞毒性和线粒体损伤有保护作用。