【摘 要】
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2021年新型冠状病毒（SARS-CoV-2）仍在全球范围蔓延,疫情防控及相关药物研发刻不容缓。针对新型肺炎（COVID-19）尚无特效抗冠状病毒药物,指南推荐的药物仍具有一定局限性,效果欠佳。百蕊草（Thesium Chinense Turcz.）为檀香科（Santalaceae）植物百蕊草的干燥全草。约有30属,400余种,分布广泛。中国现已确定有35种,6个变种,各地均存在大量产出。百蕊草载
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2021年新型冠状病毒（SARS-CoV-2）仍在全球范围蔓延,疫情防控及相关药物研发刻不容缓。针对新型肺炎（COVID-19）尚无特效抗冠状病毒药物,指南推荐的药物仍具有一定局限性,效果欠佳。百蕊草（Thesium Chinense Turcz.）为檀香科（Santalaceae）植物百蕊草的干燥全草。约有30属,400余种,分布广泛。中国现已确定有35种,6个变种,各地均存在大量产出。百蕊草载于《图经本草》,具有“清热解毒”和“通顺气脉”之功效,百蕊草本身性味平缓、微苦、涩、寒,素有“植物抗生素”之美称。百蕊草含有黄酮、有机酸、生物碱、甾醇,酚类、挥发油等多种化学组分。百蕊草全草入药,具有抗菌消炎、清热解毒、补肾涩精之功效,为一种具有较好应用前景的广谱抗菌中草药。根据文献报导桑黄具有抗甲型流感病毒A（H1N1和H3N2）和乙型流感病毒的作用。故实验设计上使用桑黄和百蕊草不同比例配伍组成复合液,充分考虑到了百蕊草较强的抗病毒作用以及桑黄较强的抗炎作用。目的:本研究旨在研究百蕊草提取物及其复合物抗新冠病毒作用及其抗炎作用,进一步补充现在传统中药对新冠病毒的研究。方法:初步筛选了百蕊草不同极性部位（乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物）、桑黄（乙醇和水提取物）对于抑制SARS-CoV-2复制的能力。以非洲绿猿猴肾上皮细胞（Vero）为宿主细胞,通过实时定量PCR检测病毒中核衣壳蛋白（NP）的表达水平。为了进一步研究百蕊草乙醇提取物和桑黄水提取物对SARS-CoV-2病毒的抗进入作用,通过实时定量PCR和Western blotting检测NP的表达水平。评估了不同极性部位的百蕊草和桑黄提取物（乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物）对脂多糖（LPS）刺激的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）细胞中炎症细胞因子产生的抑制活性。利用ELISA和PCR检测肿瘤坏死因子（TNF-α）和白介素-6（IL-6）的表达水平。最后对于复合物（百蕊草乙醇提取物和桑黄水提物依照比例1:1、1:2、2:1）抑制SARS-CoV-2复制和进入的能力,进行PCR检测NP的表达水平。利用ELISA和PCR检测对LPS刺激的RAW264.7细胞中TNF-α和IL-6的抑制活性。结果:百蕊草乙醇提取物显著抑制在Vero细胞中SARS-CoV-2的复制(EC50:259.3μg/mL)和进入(EC50:364.2μg/mL),并显著降低LPS刺激的RAW264.7细胞产生的IL-6和TNF-α水平。石油醚(EC50:163.6μg/mL)、乙酸乙酯(EC50:22.92μg/mL)和正丁醇(EC50:56.80μg/mL)提取物对Vero细胞中SARS-CoV-2复制的抑制作用较弱,而水提取物则完全没有活性。在抗炎作用中,百蕊草石油醚部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分在特定药物浓度范围内表现出明显的浓度依赖性,并且随着浓度的增加,LPS诱导的IL-6和TNF-α的表达水平逐渐降低。水提取物仅在160μg/mL的低浓度下对LPS诱导的TNF-α表达有轻微的抑制作用。桑黄乙醇提取物(EC50:690.3μg/mL)和水提物具有一定的抑制SARS-CoV-2的复制作用,但无抗病毒进入作用。桑黄各部位均呈现较好的抗炎效果,并且随着浓度的增加有明显的浓度依赖性,其中桑黄水提取物呈现出极显著的抗炎作用。复合物1(百蕊草:桑黄=1:1,EC50:500.6μg/mL),复合物2(百蕊草:桑黄=1:2,EC50:522.9μg/mL),复合物3(百蕊草:桑黄=2:1,EC50:410.8μg/mL)均能较好抑制SARS-CoV-2的复制,针对SARS-CoV-2的进入阶段复合物1(EC50:593.9μg/mL)抑制病毒作用较优于复合物2和复合物3。三种复合物均对细胞炎症因子TNF-α、IL-6的释放量的有极显著抑制的作用,且呈现明显趋势。结论:百蕊草乙醇提取物及其复合物1能显著抑制在Vero细胞中SARS-CoV-2的复制和进入,并显著降低LPS刺激的RAW264.7细胞产生的IL-6和TNF-α水平。
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