【摘 要】
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目的 观察温肾通络止痛方对巨噬细胞极化的作用，探讨其对破骨细胞分化的影响。方法 利用脂多糖建立炎性巨噬细胞模型，小鼠骨髓单核细胞体外建立破骨细胞诱导模型。通过CCK8法检测不同浓度温肾通络止痛方冻干粉对巨噬细胞增殖的影响。将实验分为正常组、模型组、中药组，通过ELISA检测巨噬细胞培养基上清中IL-6、TNF-α、TGF-β、IL-10的表达，利用蛋白免疫印迹法检测NF-κB信号通路相关蛋白及IN
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（82074458;82174411）； 江苏省自然科学基金面上项目（BK20221351）； 江苏高校中西医临床医学品牌专业建设工程资助项目（2020PPZXL261）； 江苏省科研与实践创新计划项目（KYCX221882,KYCX221883）；
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目的 观察温肾通络止痛方对巨噬细胞极化的作用，探讨其对破骨细胞分化的影响。方法 利用脂多糖建立炎性巨噬细胞模型，小鼠骨髓单核细胞体外建立破骨细胞诱导模型。通过CCK8法检测不同浓度温肾通络止痛方冻干粉对巨噬细胞增殖的影响。将实验分为正常组、模型组、中药组，通过ELISA检测巨噬细胞培养基上清中IL-6、TNF-α、TGF-β、IL-10的表达，利用蛋白免疫印迹法检测NF-κB信号通路相关蛋白及INOS、TNF-α蛋白的表达。采用TRAP染色及F-actin免疫荧光检测温肾通络止痛方对破骨细胞分化的影响。结果 CCK8结果显示温肾通络止痛方冻干粉48h 125μg/mL对巨噬细胞的增殖效果最好（P＜0.01）。酶联免疫法检测结果表明，与正常组比较，模型组巨噬细胞上清液中IL-6、TNF-α的表达升高，IL-10、TGF-β的表达降低；经温肾通络止痛方干预后IL-6、TNF-α的表达降低，IL-10、TGF-β的表达升高，且各组间差异具有统计学意义（P＜0.01）。蛋白免疫印迹法结果表明，与正常组比较，模型组中p-p65/p65、TNF-α、INOS蛋白表达升高（P＜0.01）,IκBα的表达降低（P＜0.01）,与模型组比较，中药组中p-p65/p65、TNFα（P＜0.01）、INOS（P＜0.01）的蛋白表达降低，IκBα的表达升高（P＜0.05）。TRAP和F-actin检测结果显示，各中药组均能减少破骨细胞数目，减小F-actin环面积，并减少环的数目，且各组之间差异具有统计学意义（P＜0.01）。结论 温肾通络止痛方可能通过抑制NF-κB信号通路的相关蛋白的表达，抑制巨噬细胞M1极化，从而抑制破骨细胞的分化。
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