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由于猪精子冷冻后的低成活率和人工授精后的低繁殖率,使得猪精液冷冻保存技术难以得到推广,为了进一步提高冷冻解冻后猪精液的质量,保护精子抵抗低温打击的能力。本试验以红景天多糖、枸杞多糖、海藻糖作为冷冻保护剂;以半胱氨酸、谷胱甘肽、亚牛磺酸作为抗氧化剂,以冷冻解冻后精子的活力、活率、线粒体活性、质膜完整率和顶体完整率作为评价指标,利用碘化丙啶(PI)、罗丹明123、低渗肿胀试验(HOST)和异硫氰酸荧光素连接的花生凝集素(PITC-PNA)分别检测了精子的活力、线粒体活性、质膜完整率和顶体完整率。同时研究了解冻方法,冷冻剂型对冷冻解冻后活率的影响并对冷冻解冻后精子的DNA损伤状况作了初步探讨,得到如下结果。1.在猪的精液冷冻过程中,在传统的稀释液TCG基础上,添加质量分数为6%的红景天多糖,6%～8%的枸杞多糖,4%的海藻糖均可提高猪精子冻后活力、活率、质膜完整率,顶体完整率,都显著好于对照组(P<0.05),且冷冻保存效果依次为红景天多糖>海藻糖>枸杞多糖。2.采用不同解冻方法解冻,虽然各组之间活力表现差异显著,50℃水浴12s解冻精子活力最高(41.56%),但是从37℃孵育的结果来看,以37℃水浴45s的解冻效果最佳。3.分别采用0.25ml和0.5ml细管冷冻,解冻后两者活率比较差异不显著(P>0.05),但0.25ml(37.97%)细管冷冻效果优于0.5ml(37.20%)细管。4.添加5 mM半胱氨酸获得最高冻后活率(40.20%)、质膜完整率(45.01%)和顶体完整率(64.35%),但与添加2.5 mM组冻后活率(40.15%)、质膜完整率(44.22%)和顶体完整率(62.41%)比较差异不显著(P>0.05)。与其他各添加组及对照组比较均表现为差异显著(P<0.05),最佳添加量为2.5 mM～5 mM。5.添加1 mM谷胱甘肽可显著提高猪精子的冻后活率(42.38%)、质膜完整率(48.10%)和顶体完整率(62.95%),最佳添加量为1 mM。6.添加亚牛磺酸对冻后猪精子的活率影响与对照组比较差异不显著(P>0.05),但添加1 mM亚牛磺酸冻后精子质膜完整率(43.10%)和顶体完整率(56.90%)与其他各组比较均表现为差异显著(P<0.05)。7.冷冻会造成猪精子DNA的损伤,添加体积分数为2～3%的甘油可显著降低DNA损伤的比例。8.添加2.5～5mM半胱氨酸,1mM的谷胱甘肽和亚牛磺酸可显著降低冷冻对猪精子造成的DNA损伤。