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目的: 本研究旨在探讨督脉芒针透刺促进大鼠脊髓半横断损伤后移植的骨髓间充质干细胞(BMSCs)的存活、分化及受损轴突的再生和功能的修复,并分析其中可能的作用机制。 方法: (1)采用全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠BMSCs,经叔丁基茴香醚(BHA)诱导后用Hochest33342标记;(2)将SD大鼠随机分为假手术组、手术对照组、BMSCs移植组、芒针透刺组、芒针透刺+BMSCs移植联合组。构建大鼠半横断脊髓损伤的模型,移植组和联合组在大鼠脊髓半横断术后7d经腰椎蛛网膜下腔移植BMSCs,芒针透刺组和联合组在大鼠术后9d给予督脉芒针透刺(选取大椎透至阳,脊中透腰阳关)治疗,隔天一次,至术后30d;(3)治疗后每周行BBB评分;14d后,取大鼠脊髓损伤区及邻近脊髓组织检测神经营养素-3(NT-3)的分泌量;治疗后30d,在双侧大脑皮层注射生物素葡聚糖胺(BDA)进行顺行标记;经灌注、取材、切片后进行HE、Nissl染色及免疫荧光检测等。 结果: (1)采用全骨髓细胞贴壁法成功分离大鼠BMSCs并不断扩增,经BHA诱导后BMSCs可向神经元样细胞分化,免疫荧光鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)呈阳性表达;(2)治疗后30d,在移植BMSCs的两组大鼠中,联合组明显促进BMSCs分化为神经元样细胞;(3)治疗两周后,与其它治疗组对比,联合组脊髓损伤处及其头、尾侧脊髓组织内的NT-3表达最高;(4)治疗14d后BBB评分开始逐渐增高,联合组的BBB评分高于其它治疗组;(5)联合组中脊髓损伤处的神经纤维丝(NF-200)、5-羟色胺(5-HT)和降钙素基因相关肽(CGRP)阳性神经纤维明显较其它组多,而胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)明显少于其他组;(6)荧光显微镜下观察:手术对照组脊髓损伤处头侧较远的地方出现BDA阳性皮质脊髓束。而芒针透刺组、BMSCs移植组和联合组在脊髓损伤处头侧端附近就可观察到较多BDA阳性皮质脊髓束神经纤维,且在联合组中,脊髓损伤区出现少量再生的皮质脊髓束神经纤维。 结论: 督脉芒针透刺能够促进移植的BMSCs分化为神经元样细胞并促进大鼠脊髓损伤处及其邻近组织分泌NT-3;督脉芒针透刺与BMSCs移植联合治疗更能促进受损的轴突再生,在一定程度上有助于改善其运动功能。