酸枣仁总黄酮提取及HPLC指纹图谱研究

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为了加强中药酸枣仁综合开发利用与陕北酸枣基地酸枣仁的质量控制,本研究采用星点设计-效应面法对酸枣仁总黄酮最佳超声波提取工艺进行了预测和检验;利用高效液相色谱紫外(HPLC-UV)和蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)建立酸枣仁的标准指纹图谱并结合指标性成分酸枣仁皂苷A定量分析的方法,对不同产地的酸枣仁质量进行了系统、综合的评价,获得了以下主要结论:1.明确了酸枣仁总黄酮提取的影响因素。系统考察了影响超声波提取法提取酸枣仁总黄酮提取效果的因素,如提取次数、提取温度、提取时间、提取溶剂浓度、液料比和预浸时间,利用数学软件对试验结果进行了分析。各因素对酸枣仁总黄酮提取效果的影响顺序由大到小依次为:提取温度、提取时间、乙醇浓度、液料比和预浸时间。2.获得了酸枣仁总黄酮提取的最佳工艺参数,为酸枣仁有效成分的提取提供了新方法。在单因素试验的基础上,选取对酸枣仁总黄酮提取效果影响较显著的提取时间、提取溶剂浓度和液料比三个因素,利用星点设计-效应面法对酸枣仁总黄酮的超声提取工艺进行了优化和检验。最佳提取工艺为:将酸枣仁预浸30 min后,利用84%的乙醇水溶液,以40﹕1的液料比,在70℃下提取3次,每次提取30 min,在此条件下,总黄酮提取率达到了95.05%。3.建立了酸枣仁HPLC-UV、HPLC-ELSD标准指纹图谱,认为HPLC指纹图谱技术结合指标成分定量分析的方法对中药材质量进行评价,结果更为可靠。利用建立的指纹图谱,对来自陕北、河北、辽宁、山东、宁夏、河南、缅甸等13个产地的16批样品进行了质量评价,其中以陕北酸枣仁样品质量较优,其指纹图谱相似度较高,均大于0.9754;酸枣仁皂苷A含量高且稳定,06、07、08三年平均含量达到了0.9640 mg·g-1。河南、缅甸酸枣仁质量较差,指纹图谱相似度较低且前者未检测出酸枣仁皂苷A,后者酸枣仁皂苷A含量很低(0.1370 mg·g-1);其他各产地酸枣仁指纹图谱相似度较高,酸枣仁皂苷A含量以山东烟台最高,达到了1.1109 mg·g-1;陕西宝鸡最低,为0.8123 mg·g-1。主产区的酸枣仁较其它地区的质量更优,药用价值更大。从而说明,环境因子对中药材质量具有重要影响,为酸枣仁道地基地的选择提供了理论依据。4.明确了加工处理、贮藏年限和嫁接对酸枣仁药材质量的影响。与生品酸枣仁相比,炒品酸枣仁的化学成分种类变化不大,但含量均有提高;与标准酸枣仁相比,炒品与生品相似度均较高,其中炒品略高于生品,且指标性成分酸枣仁皂苷A含量较生品提高了7.18%;由此说明,炒制对酸枣仁药材的化学成分有一定影响,且由于酸枣仁皂苷A是镇静催眠作用的主要有效成分之一,因此炒品酸枣仁药效在安神、睡眠方面优于生品酸枣仁。贮藏2年(06年收)、1年(07年收)和当年采收(08年)的酸枣仁样品化学成分种类基本一致,与标准酸枣仁相比,相似度均较高,化学成分含量保持稳定,指标成分酸枣仁皂苷A含量也比较稳定。说明在适宜的储存条件下,贮藏2年不会影响酸枣仁药材的质量。对宁夏产野生酸枣仁和同一产地与大枣嫁接后的酸枣仁进行比较,发现酸枣仁化学成分种类变化不大,与标准酸枣仁相比,二者相似度均较高。但嫁接后的酸枣仁化学成分含量普遍降低,指标性成分酸枣仁皂苷A含量也明显降低,说明嫁接对酸枣仁的质量及药用价值有影响。
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