固相萃取在南极磷虾制品各类型酯脂肪酸分析中的应用

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南极磷虾产量大,营养价值高,因富含必需氨基酸、磷脂、虾青素和ω-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)而具有良好的开发价值。随着我国人民对健康食品需求的日益增加,南极磷虾产品无疑成为我国今后主要开发对象之一。目前,对南极磷虾及其制品脂肪酸含量的分析主要集中在总脂肪酸含量的测定,由于PUFAs不同酯的结合会影响其生物利用度,因此,有必要对南极磷虾不同类型酯脂肪酸的含量进行准确定量。本文研究了南极磷虾甘油磷脂分子种种类,基于固相萃取技术建立了南极磷虾油中甘油三酯和磷脂型脂肪酸含量分析方法,基于基质固相分散技术(MSPD)建立南极磷虾粉中游离脂肪酸的分析方法,为南极磷虾脂质的研究及产品标准的建立提供方法学支撑。为了明确脂肪酸在各类甘油磷脂的分布,基于各类甘油磷脂在质谱中的特异性电离模式,采用鸟枪质谱法对南极磷虾中甘油磷脂分子种进行了定性分析,包含磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰丝氨酸(PS)和磷脂酰肌醇(PI)。根据一级质谱和二级质谱信息推导得到甘油磷脂分子种225个,PE、PS、PG、PC和PI的分子种信息分别为45个。其中含有二十碳五烯酸(EPA)的分子种有57个,含有二十二碳六烯酸(DHA)的分子种为53个。由此可知,南极磷虾油中的甘油磷脂分子种含有丰富的EPA和DHA,具有极高的营养价值。为了明确南极磷虾油中甘油三酯和磷脂型各类脂肪酸的含量,通过固相萃取建立南极磷虾油中磷脂和甘油三酯型各类脂肪酸的含量分析方法。对影响分析的条件进行优化,最优条件为20 mg南极磷虾油样品用正己烷定容到1 m L后上样至500 mg固相萃取柱,先用4 m L正己烷-乙醚混合溶液以流速1 m L/min洗脱,得到分离后的甘油三酯样品,依次分别用4 m L正己烷-乙酸乙酯混合溶液和乙酸-乙醚混合溶液淋洗后,使用3 m L甲醇以流速1 m L/min洗脱得到磷脂样品,经碱水解和衍生化后,通过气相色谱进行分析。经本方法测得的加标回收率在84.22%-94.48%之间,日内和日间精密度在0.87%-8.15%之间。将本方法应用在测量南极磷虾油在贮藏过程中甘油三酯和磷脂型各类脂肪酸的含量变化,结果表明,在21天贮藏过程中,甘油三酯和磷脂型脂肪酸含量均下降,且降解率随温度升高而增加。为了简化南极磷虾中游离脂肪酸的分析方法,基于基质固相分散技术建立南极磷虾粉中游离脂肪酸的快速和准确的分析方法。制备氨基化介孔分子筛NH2-SBA-15并将其应用于MSPD。通过红外光谱表明氨基成功的修饰在SBA-15表面;通过静态吸附和动态吸附实验表明分子筛的多孔结构提高了NH2-SBA-15对脂肪酸的吸附量,优于传统的氨基化硅微球。对影响分析的各条件进行优化确立方法,经建立方法的加标回收率为82.17%-96.43%,日内、日间精密度为0.19%-5.26%。将该方法应用于贮藏南极磷虾粉中萃取游离脂肪酸,经贮藏后的南极磷虾粉中的游离脂肪酸含量增加,游离脂肪酸的增加量随温度升高而升高。
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