肺癌转基因小鼠的构建

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目的:近十年来,肺癌已经成为致死率最高的癌症,超过了乳腺癌,胰腺癌,前列腺癌和直肠癌的总和。在人类肺癌的发生发展过程中,原癌基因neu的过表达和K-ras基因的突变在临床检测中都频繁的出现。在国内外的研究中建立了各种肺癌的动物模型,但是以肺泡特异性的SPC(surfactant apoprotein C)启动子带上原癌基因neu的转基因动物模型还未见报导。我们希望通过建立这一类与人类肺癌发病相似的动物模型研究癌症与干细胞的关系并进一步研究其发病机理,发展过程以及基因治疗的方法。 方法:转基因小鼠是指以导入外源基因,在染色体组内稳定整合表达并能遗传给后代的一类动物,被广泛的用于疾病模型的建立,基因功能的研究等方面。本研究通过基因克隆,显微注射,Southern杂交,FISH,免疫组织化学,实时定量PCR等方法建立鉴定转基因阳性小鼠。 结果:通过Southern杂交检测到了完整的外源片段SPC-neu在小鼠基因组的插入,FISH确定该片段插入16号染色体,实时定量PCR结果显示转基因小鼠在mRNA水平上的neu基因的表达要远高于正常小鼠。 病理切片H/E染色发现转基因鼠较正常鼠有明显的肺间质性炎症反应,肺间质组织细胞增生,淋巴细胞浸润其中,毛细血管淤血等病变。免疫组织化学检测肺neu表达,结果显示转基因鼠肺泡上皮细胞、间质细胞及支气管上皮细胞胞浆中度染色,正常鼠肺泡及支气管上皮细胞胞浆轻度或无染色。 结论:从以上试验结果,我们可以初步肯定已经得到了neu过表达转基因小鼠模型。
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