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ErbB2分子属于表皮生长因子受体家族的一员,有25%-30%的乳腺癌患者呈现ErbB2分子异常高表达。近年来针对ErbB2高表达乳腺癌的靶向治疗的疗效已得到基础研究及临床试验的证实。高亲和力的单克隆抗体可以更为有效地特异的与ErbB2分子膜外区结合,进而抑制肿瘤细胞增殖或诱导肿瘤细胞凋亡。前期,我研究组利用噬菌体筛选技术获得了一株在曲妥珠单抗耐药且ErbB2高表达的细胞系有较强杀伤活性的全人源单克隆抗体F11。如能进一步得到ErbB2和全人源抗体F11的复合物晶体结构,对我们研究两者相互作用和识别的分子机制有着重要意义。本项工作的主要研究目的是通过对ErbB2和新型全人源ErbB2抗体F11抗体复合物晶体的研究,阐释两者相互作用和识别的分子机理,对该抗体的进一步治疗性评价夯实基础。 我们利用真核生物表达系统表达ErbB2分子的细胞膜外端及F11抗体。重组的ErbB2蛋白胞外段C端引入6×His(组氨酸)标签蛋白,带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附,利用镍柱亲和层析法达到纯化蛋白的目的。利用该系统表达的蛋白产量高,可溶性好,可获得纯度高且稳定性好ErbB2-ECD蛋白。利用同样方法构建及表达从噬菌体抗体库中筛得的F11抗体经ELISA检测单抗的结合特异性,并且利用MTS方法检测所获抗体对表达ErbB2阳性肿瘤细胞的生长抑制作用。在获得纯度良好且稳定性高的ErbB2-ECD与F11抗体的复合物蛋白后,我们后采用悬吊液滴蒸汽扩散法,对蛋白结晶条件进行筛选。一定时间后观察发现,在多种结晶条件下均出现了晶体。 表皮生长因子受体家族以其在胚胎发育及肿瘤中的重要作用,近年来为越来越多的研究者所关注,该研究为后续晶体结构解析以及进一步研究ErbB2分子与全人源抗体F11的作用机制提供依据。