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目的探讨用胰岛素(Insulin,INS)提高人肺腺癌细胞株A549生长代谢水平后对化疗药物顺铂(DDP)敏感性的影响和机制,为临床应用提供实验依据。方法以体外培养的人肺腺癌细胞株A549为靶细胞,以胰岛素作为代谢促进剂,运用四氮唑盐方法观察胰岛素联合化疗药物顺铂(DDP)对A549细胞活力及细胞代谢等的影响。流式细胞仪检测不同加药处理组的周期时相变化情况。Western Blot印迹方法检测不同加药处理组的细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果1.作用浓度在2～32mU/ml,胰岛素对人肺腺癌细胞株A549有促增殖作用,其中4～16mU/ml各组OD值均明显高于对照组(P＜0.01),较其他浓度组和对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01)。2.作用时间在8～16h,胰岛素对于人肺腺癌细胞A549有促进增殖作用(P＜0.01),其与对照组和其他时间组相比(P＜0.01),差异有统计学意义。3.化疗药物浓度确定:结果表明,化疗药物的浓度与细胞抑制率之间存在直线相关关系。根据MTT试验结果,实验时选取抑制率为30%的药物浓度(即IC30)作为加药浓度。IC30约为36.87μg/ml。4.胰岛素诱导化疗药物增敏实验:各时间组抑制率结果表明在给予DDP前8～16h加入胰岛素(浓度8.0mU/ml),可以提高化疗药物DDP对于A549的抑制率。各浓度组抑制率结果提示:胰岛素浓度在2.0～16.0mU/ml时,能够增强化疗药物DDP对A549的抑制率,与单纯化疗药物组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01)。5.流式细胞检测结果:在胰岛素(8mU/ml)作用4、8、12、16、20h,各时间点S期细胞比例与对照组相比,差异具有显著性。在4～12h,随着作用时间的延长,A549的S期细胞比例逐渐增多,但是在20h、24h,实验组S期细胞的比例逐步与对照组接近。DDP能引起A549的S期细胞阻滞,胰岛素可增加DDP对A549的S期细胞阻滞。6.Western Blot印迹方法检测结果:胰岛素作用4～20h,各时间组与对照组比较,CyclinD1的表达明显增强,CyclinA的表达变化不明显。单用顺铂组较对照组比较,CyclinA的表达明显增强,CyclinD1的表达变化不明显。胰岛素联合顺铂组较单用顺铂组比较,CyclinA、CyclinD1的表达变化均不明显。结论1.胰岛素有促进人肺腺癌细胞株A549增殖作用。在胰岛素作用浓度为4～16mU/ml,作用时间为8～16h时,胰岛素的促增殖作用最为明显。胰岛素主要作用于人肺腺癌细胞株A549细胞周期的S期。CyclinD1的表达增强在胰岛素促增殖机制中起着重要作用。2.胰岛素具有化疗增效作用。胰岛素用药的时机选择是实现增效的关键,在化疗前8～16h使用胰岛素,使用浓废为2.0～16.0mU/ml时,胰岛素能够增加顺铂对人肺腺癌细胞株A549的抑制率。其机制可能为:胰岛素能够使A549的S期细胞比例增加,与DDP有协同作用。3.顺铂对人肺腺癌细胞株A549细胞周期的影响表现为S期的阻滞,CyclinA的表达增强在其作用机制上起着重要的作用。4.证实提高人肺腺癌细胞株A549代谢水平后可以提高化疗药物的细胞毒作用。