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在缺乏支持感染的细胞培养系统和动物模型的情况下，研究者常采用1.3倍基因组克隆转染肝细胞系来研究乙型肝炎病毒(HBV)临床分离株的体外表型特征。但是，受限于HBV基因组本身的复杂性，传统的构建方法操作繁琐，不利于规模化的研究。在本研究中，我们建立了一种新颖而简便的，适用于从HBV感染者血液样本中直接构建1.3倍基因组克隆的方法。以HBV感染者血液样本提取的DNA样品为模板，采用一步PCR方法分别扩增HBV基因组的两个片段:片段A(nt961-nt3215/ntl-nt268)和片段B(nt204-nt2043)，再通过位于nt247位的保守的Xbal限制性内切酶位点连接形成以HBV的961位核苷酸作为起点、2043位核苷酸作为终点的1.3倍基因组克隆，新方法的构建周期由传统方法的2周左右缩短至5天左右。这一方法在151例慢性HBV感染者血清标本队列中进行了验证，151例样品中有102例能够成功的扩增出两个目的片段(67.5％)，扩增成功率与样本原始HBV DNA水平呈正相关。采用上述构建方法，我们成功构建了涵括基因型A、B、C、D、E、F、G、H和I的HBV的13株代表性1.3倍基因组克隆，并对这些代表株在Huh7细胞中的病毒RNA转录、DNA复制、各种病毒蛋白表达及分泌等体外表型特征进行了初步研究，结果显示不同基因型，甚至同一基因型中不同基因亚型的病毒株的体外表型特征均可能存在差异，提示HBV自然进化中产生序列异质性可能造成病毒表型功能的显著改变。综上，本研究建立了乙型肝炎病毒1.3倍基因组克隆的简便构建方法，为规模化分析慢性HBV感染者所携病毒株的体外表型特征提供了有力手段。深入研究不同基因型、不同基因亚型的HBV在表型功能上的差异及其机制，可能为解释它们在流行特征、致病性、感染长期转归结局的差异提供科学依据。