【摘 要】
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目的:EMT在膀胱纤维化过程中可能发挥重要作用。本研究通过膀胱灌注LPS构建炎性膀胱纤维化大鼠模型探讨EMT和膀胱纤维化的关系,同时利用LPS构建膀胱上皮细胞EMT体外模型并探讨TGF-β信号通路对EMT的调控作用。方法:1.体内实验:选取18只雌性SD大鼠,随机分为LPS组、PBS组和对照组三组。对照组除正常饲喂外不做其他处理。对LPS组和PBS组分别进行膀胱灌注LPS溶液（500μg/500μ
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目的:EMT在膀胱纤维化过程中可能发挥重要作用。本研究通过膀胱灌注LPS构建炎性膀胱纤维化大鼠模型探讨EMT和膀胱纤维化的关系,同时利用LPS构建膀胱上皮细胞EMT体外模型并探讨TGF-β信号通路对EMT的调控作用。方法:1.体内实验:选取18只雌性SD大鼠,随机分为LPS组、PBS组和对照组三组。对照组除正常饲喂外不做其他处理。对LPS组和PBS组分别进行膀胱灌注LPS溶液（500μg/500μl）或等量PBS溶液（500μl）,隔天灌注1次,连续4周,获取膀胱标本制备石蜡切片,通过（1）HE染色评价膀胱炎症;（2）TUNEL染色评价细胞凋亡情况;（3）Masson染色和Sirius Red评价膀胱纤纤维化程度;（4）免疫染色方法评价EMT和TGF-β1/p-smad3信号通路激活水平;2.体外实验:通过体外培养SV-HUC-1细胞,（1）使用不同浓度的LPS（0、1、2、4、6、8、10μg/ml）对细胞进行诱导,通过CCK-8和划痕实验对细胞增殖能力和迁移能力进行评价,选择促进细胞增殖和迁移的最适浓度;（2）用最适浓度的LPS诱导细胞48 h后,免疫荧光检测ECadherin和Vimentin蛋白表达;（3）提前选择性抑制Tβ1R,检测LPS诱导后E-Cadherin和Vimentin蛋白表达;结果:1.LPS灌注后大鼠膀胱出现上皮增生、粘膜下水肿、淋巴细胞浸润等慢性炎症改变、细胞凋亡以及明显的纤维化改变;2.LPS灌注后大鼠膀胱上皮层E-cadherin+/Vimentin+细胞数目明显增加,大鼠膀胱组织TGF-β1和p-smad3蛋白表达水平上调;3.4μg/ml为LPS促进SV-HUC-1细胞增殖和迁移的最适浓度,使用4μg/ml的LPS处理48 h后,细胞出现E-Cadherin下调和Vimentin上调的EMT改变,而通过选择性抑制Tβ1R可预防LPS诱导EMT的水平。结论:膀胱灌注LPS可诱导大鼠膀胱出现炎症、纤维化和EMT等病理改变同时激活TGF-β信号通路,这提示慢性炎症-EMT-纤维化可能是LPS诱导膀胱纤维化的重要途径;LPS还可在体外诱导SV-HUC-1发生EMT并接汕头大学医学院硕士研究生学位论文受TGF-β信号通路的调控,提示TGF-β信号通路可能是预防EMT乃至EMT依赖性膀胱纤维化的重要靶点,LPS诱导的膀胱EMT模型也可作为后续探讨抗EMT乃至抗纤维化研究的重要工具。
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