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目的1.通过MTT法检测肝癌细胞系HepG2对靶向药物sorafenib和新一代化疗药物(伊立替康、奥沙利铂、吉西他滨、紫杉醇)的敏感性。2.索拉非尼作用于HepG2细胞,监测0～48小时对肝癌细胞系HepG2的细胞周期分布的影响。3.检测索拉非尼与伊立替康不同时序联合的疗效差异,筛选出最优效应的联合方式。4.初步探讨细胞周期改变及协同的相关机制。方法:通过MTT法检测体外条件下肝癌细胞系HepG2分别对索拉非尼、奥沙利铂、吉西他滨、紫杉醇、伊立替康作用48小时的半数抑制率并绘制HepG2细胞的生长曲线和倍增时间。索拉非尼作用于HepG2细胞,分别于6、9、12、20、24、27、30、33、36、48小时,流式检测索拉非尼作用不同时间细胞的周期分布情况,并取索拉非尼作用30小时,分别以不同时序联合伊立替康和奥沙利铂的20%抑制浓度作用48小时,流式测各组凋亡率,real-timeRT-PCR检测野生型P53在各组中的表达情况。结果1.HepG2的倍增时间为24小时,第一天处于停滞期,第二、三天后细胞处于指数生长期。2.HepG对四种化疗药物均为高度敏感。各半数抑制率(IC50)分别为伊立替康:7.84ug/ml吉西他滨:4.14ug/ml奥沙利铂:1.0ug/ml紫杉醇:2.33ug/ml。HepG2对索拉非尼中度敏感,IC50:4.79ug/ml。3.索拉非尼10umol/L作用于肝癌细胞HepG2的48小时内周期分布,S期的比率随作用时间的延长逐渐增加,至30小时达到高峰51.44%,之后逐渐下降。4.索拉非尼以不同时序联合伊立替康及奥沙利铂得出最高凋亡率组,索拉非尼10umol/L作用30小时后序贯给予伊立替康的IC20浓度作用48小时凋亡率最高,达到50.27%.5.Real-time RT-PCR测六组(A组:索拉非尼30h+伊立替康48小时B组:索拉非尼作用48小时C组:伊立替康48h+索拉非尼30hD组、索拉非尼作用30小时E组:伊立替康作用48小时F组:空白)的野生型P53mRNA表达量的变化。结论1.体外实验中,HepG2对伊立替康、奥沙利铂、吉西他滨、紫杉醇高度敏感,对索拉非尼中度敏感。2.索拉非尼对HepG2细胞的周期分布有影响,其改变与作用时间相关。3.索拉非尼与伊立替康联合的凋亡诱导作用具有时序依赖性,先给予索拉非尼作用30小时,序贯给予伊立替康作用48小时得到最大协同效应,索拉非尼对细胞周期的影响在此增敏机制中起作用。4.索拉非尼作用于HepG2细胞,下调其野生型P53mRNA的表达量,此下调作用与作用时间相关,P53的下调可能参与增敏伊立替康。