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脐血中富含造血干/祖细胞(HSC/HPC),且来源广、容易获得,可用于造血干细胞移植,其移植物抗宿主病(GvHD)发生率低、症状亦较轻。但单份脐血中所含的造血干细胞数量有限,而且脐血在分离、冻存、复融等过程中都会不同程度地丢失HSC/HPC,这大大限制了脐血在成人移植的应用。因此为了增加脐血中造血干细胞的数量,有效的方法之一是进行脐血干细胞的体外扩增。 本研究以脐血CD34表达阳性的细胞作为目的细胞,研究其在分离纯化中的丢失情况;在系特异性细胞因子的作用下,CD34~+细胞的分化情况;在不同组合的细胞因子作用下,有核细胞(NC)和CD34~+细胞的扩增情况。 脐血经3%明胶+淋巴细胞分离液分离后,脐血单个核细胞的回收率达54.51±14.19%;单个核细胞经贴壁2小时,MACS纯化后,CD34~+细胞富集倍数达36.22倍。 脐血CD34~+细胞在系特异性细胞因子作用下,向各系方向分化。CD7、CD10的表达随着扩增时间延长,分别从8.84%、1.38%下降到0.96%、0.72%;以第7天作比较,CD13、CD41和Gly-A的表达则分别从6.28%、5.35%、4.57%上升到35.86%、25.66%、34.68%。 不同细胞因子组合以脐血CD34~+细胞的扩增效果不同。NC扩增效果最佳的细胞因子组合为FL+TPO+SCF+G-CSF+IL-6+GM-CSF+EPO+IL-3,培养14天后扩增倍数达328.93±6.59倍,但CD34~+细胞扩增效果最佳的细胞因子组合为FL+TPO+SCF+G-CSF+IL-6+GM-CSF,在第7天扩增倍数最高达25.23±8.46倍。 研究结果表明,3%明胶+淋巴细胞分离液的分离方法能提高脐血单个核细胞的回收率,贴壁2小时再用MACS纯化能提高CD34~+细胞的纯化率。细胞因子组合以FL+TPO+SCF+G-CSF+IL-6+GM-CSF+EPO+IL-3对NC的扩增效果最好,但细胞因子组合FL十TP于SCI:+G毛SF+IL.6十GM毛sI:对CD34+细胞的扩增效果最佳。