目的:本研究采用水提醇沉法从板党中提取多糖,利用阴离子交换柱色谱法和凝胶柱色谱法对板党精制多糖进行分离纯化,以期获得均一多糖;并对均一多糖进行结构鉴定以及通过脂多糖诱导的RAW264.7炎症模型对其进行抗炎活性筛选,以期获得具有抗炎活性且结构明确的均一多糖。方法:1.板党精制多糖的提取采用水提醇沉法提取板党粗多糖,并通过sevag法除蛋白以获得板党精制多糖,并利用苯酚-浓硫酸法对板党粗多糖和精制多糖进行糖含量测定。2.板党精制多糖的分离纯化取板党精制多糖,采用DEAE Sepharose Fast Flow凝胶进行分级,再利用葡聚糖G-150和G-100凝胶对各分级组分进行进一步的纯化,并采用间羟基联苯法对最终组分进行糖醛酸含量测定。3.板党均一多糖的结构表征采用紫外色谱法、高效凝胶渗透色谱法对均一多糖进行纯度检验和分子量测定,采用完全酸水解法和薄层色谱法对均一多糖进行单糖组分分析,最后,利用多种光谱技术(如红外、核磁、质谱等)以及甲基化分析等化学方法对均一多糖进行结构表征。4.板党均一多糖的活性筛选利用脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞炎症模型,检测培养基中NO的释放以及细胞中IL-6、TLR4、NF-κB、TNF-α基因的m RNA的表达来进行均一多糖的活性筛选。结果:1.9kg板党药材经水提醇沉后得1.3kg浅棕色粉末状CCOP,得率为14.4%,糖含量为63.78%。300g CCOP采用sevage法除蛋白后,得154.6g浅黄色粉末状RCOP,得率为51.5%,总得率为9.3%,糖含量为92.20%。2.从RCOP中共分离纯化得到2个多糖级分,组分RCOP1-2-1和RCOP3-1-1,得率分别为28.9%和9.3%。其中,组分RCOP1-2-1不含糖醛酸,组分RCOP3-1-1的糖醛酸含量为76.30%。3.组分RCOP1-2-1和RCOP3-1-1在280nm和260nm处均没有紫外吸收,且其高效液相色谱图均显示为一单一对称峰。组分RCOP1-2-1的相对分子质量为25.8k Da,单糖组成为果糖,其化学结构是2→1-β-D-果糖残基组成主链,末端有2位连接的β-D-果糖同时含有微量末端连接的α-D-葡萄糖的直链果聚糖。组分RCOP3-1-1的相对分子质量为49.5k Da,是由阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖以及半乳糖醛酸组成。4.RCOP、RCOP1-2-1以及组分RCOP3-1-1能显著降低LPS诱导的RAW264.7细胞培养基中的NO含量,且使细胞中TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-6的表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:1.采用水提醇沉法提取板党多糖,提取条件温和,操作简便,提取率高,且不会影响板党多糖的结构和活性。利用sevege法除蛋白,条件温和,处理后多糖的糖苷键性质不会发生改变,且蛋白转移率高。苯酚-浓硫酸法测定糖含量,操作简单、快速、灵敏、显色稳定性好且实验重复性好,是目前多糖含量测定使用最为广泛的方法。2.从组分RCOP1-2-1和RCOP3-1-1的洗脱曲线看,其洗脱峰均为单一对称,纯度较高,推测这两种多糖都是均一性多糖。根据阴离子交换色谱法的分离原理以及各组分的糖醛酸含量测定结果,推测组分RCOP1-2-1为一种中性多糖,而组分RCOP3-1-1为一种酸性多糖。3.组分RCOP1-2-1和RCOP3-1-1均不含有蛋白和核酸。组分RCOP1-2-1为一种由果糖组成的中性均一多糖,其相对分子质量为25.8k Da,其化学结构是2→1-β-D-果糖残基组成主链,末端有2位连接的β-D-果糖同时含有微量末端连接的α-D-葡萄糖的直链果聚糖;组分RCOP3-1-1是由阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖以及半乳糖醛酸组成的均一多糖,是一种相对分子质量为49.5k Da的酸性杂多糖。4.RCOP、RCOP1-2-1以及组分RCOP3-1-1均具有良好的抗炎效果。且其抗炎作用可能是通过抑制TLR4/NF-κB途径的活化来实现的,并且还可能与炎性因子TNF-α,IL-6有关。