薄荷挥发性成分的分析分离方法研究

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薄荷既是中华传统药材也是天然香精香料的重要来源,由于在我国栽培和分布范围较广,且具有良好的经济价值,因此对薄荷药材进行质量控制和研究其活性成分的分离纯化高效方法尤为重要。挥发油是从药用植物中提取出的挥发性油状混合物,具有良好的生物活性,更是有“液体黄金”的美称。薄荷挥发油是薄荷药材的主要活性成分,组成复杂,随着科学技术不断发展,研究者们通过微波或者超声辅助水蒸气蒸馏来提高得油率,利用GC/MS结合聚类分析归纳薄荷挥发油的化学型,但是水蒸气蒸馏不经济高效,GC/MS对于分析挥发油类物质也存在较低的分辨率和灵敏度问题。本文采用全二维气相色谱串联飞行时间质谱(GC×GC/TOFMS)对不同薄荷挥发油的成分进行分析并与气相色谱串联质谱(GC/MS)的方法进行对比,结合主成分分析法(PCA)对来自不同产区、部位、种植方式的薄荷挥发油化学成分进行分类并找出对分类结果影响作用较大的潜在标志物,设计并建立了一种更加温和有效的提取薄荷中活性成分的方法—颗粒辅助溶剂浮选法,以及建立分离纯化薄荷挥发油中活性单萜的高速逆流色谱(HSCCC)方法。主要研究成果有:1.提取不同产区、部位、种植方式的薄荷中挥发性成分,采用GC/MS和GC×GC/TOFMS分析样本,并对不同薄荷挥发油进行主成分分析。得到10个薄荷挥发油样品的化学成分信息;由于GC×GC分离系统的正交分离特性,得到薄荷挥发油样本GC×GC/TOFMS二维图的特征分布。通过比较峰数目和物质个数、GC×GC/TOFMS数据的重构1D色谱图和GC/MS总离子流图、相同一维时间下的二维时间展开图证明了GC×GC/TOFMS较GC/MS灵敏度更高、分辨率更高、准确度更高以及分析薄荷挥发油类似复杂体系的高效率。主成分分析结果将10个不同样本划分成三类,得到薄荷梗和薄荷叶之间差异组分,和野生品种和家种品种之间差异组分。2.设计并建立了一种新型提取薄荷中薄荷醇和薄荷酮的方法—颗粒辅助溶剂浮选法,用含有植物固体颗粒的溶液作为溶剂浮选的下相分离薄荷中的挥发性单萜。原始悬浮液以1:10(w/v)的料液比制备,并且未经超声波处理和盐处理,在溶剂浮选的最佳条件(pH值4,乙醇浓度20%(v/v),氮气流量30 m L/min,浮选时间30 min)下,薄荷醇、异薄荷酮和薄荷酮的产率分别为1.2×10~3 mg/kg、9.5×10~1 mg/kg和2.0×10~2 mg/kg。与传统方法相比,所建立的颗粒辅助溶剂浮选法温和、经济和高效。通过细胞抗氧化活性实验和分子对接实验,表明浮选产物薄荷醇具有神经保护生物活性和成为淀粉样蛋白-β抑制剂的潜力。3.建立了分离纯化薄荷挥发油中活性单萜的HSCCC方法,选择最佳溶剂体系正己烷/乙腈(13:7,v/v)和高速逆流色谱分离条件(进样量800.0mg,转速800 rpm和流动相流量2 m L/min)同时分离得到两种纯度较高的物质,纯度为85.1%的薄荷醇,纯度为94.2%的乙酸薄荷酯。
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