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人工微RNA(artificial microRNA,amiRNA)干扰技术是一种高效的基因沉默技术,在基因研究中起到了很重要的作用,其基本原理是,以天然的miRNA前体为骨架,用人工设计的amiRNA替换原始miRNA序列,构建成为新的miRMA前体,生成人工miRNA,用以降低靶基因的表达量。传统的正向遗传筛选和普通的T-DNA插入等反向遗传学方法均难以应对功能冗余的基因家族的研究,而通过amiRNA干扰技术研究功能冗余的基因家族更是成为趋势。转录因子种类繁多,家族基因成员庞大,但是在C02诱导气孔运动方面未有转录因子被鉴定,而在热胁迫的研究中发现的转录因子多存在功能冗余。为了解决这一问题,本研究通过构建拟南芥amiRNA干扰转录因子突变体库,并通过合适的方法,筛选出响应CO2和热胁迫的突变体。本研究得到的主要研究结果如下:1.建立了拟南芥amiRNA干扰转录因子突变体库以拟南芥生态型Col-0为背景植株,建立了 amiRNA转录因子突变体群体,本研究中,利用网站WMD3(Web MicroRNA Designer)针对拟南芥中的转录因子设计了 amiRNA,设计的amiRNA能够以基因家族中的至少两个基因为靶基因。构建载体后,利用农杆菌介导的花浸法将amiRNA的DNA文库转化到野生型中,得到了含有不同amiRNA的转基因植株,成功构建了 amiRNA转录因子突变体库。2.筛选到了几个C02诱导气孔关闭缺陷的转录因子突变体为了得到参与高C02诱导的气孔运动的转录因子突变体材料,本研究使用不同浓度C02(400ppm,800ppm)处理T1代转基因植株,并利用远红外成像技术对突变体群体叶片温度进行检测,比较处理前后突变体植株与野生型之间的叶片温度的差异,获得了 12个独立的对C02不敏感或敏感程度降低的突变体(CO2-insensitive mutants,cim),并且进一步对其中命名为ciml的突变体植株进行深入研究,我们发现ciml对高浓度C02的敏感程度下降,说明筛选出的转录因子突变体对高浓度C02诱导的气孔关闭是受到破坏的。3.筛选到了部分与植物热胁迫相关的转录因子突变体为了得到与热胁迫相关的转录因子突变体,本研究参考文献后,改进筛选方法,确定了热胁迫筛选条件:38℃处理1.5小时,21℃恢复2小时,50℃处理2小时。初次筛选后得到部分热胁迫相关突变体,为后续的研究提供了实验材料。